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产品简介：

基因组 DNA（gDNA）污染是 RNA 样品中普遍存在的现象。由于污染的gDNA 也会作为后续PCR 的模板，因此会严重干扰后续 RT-PCR 的效率和准确性，尤其是定量RT-PCR。目前的去gDNA 污染的方法主要是用RNase-free DNase 法降解RNA样品中的 gDNA，灭活 DNase 后，然后再进行 RT 反应。此方法分两步进行，十分不便。为了克服上述方法的缺点，本公司开发出了本产品。

产品特点：

1.一管式去除 gDNA，跟 RT-PCR 反应的设置同步进行。

2.高效，可以使样品中残留的 gDNA 污染（ng 级）降低到 PCR 检测不到的水平。

3.跟PCR 和荧光定量PCR 兼容，包括基于古细菌DNA 聚合酶的PCR（如Pfu DNA

聚合酶，多为高保真酶）。

4.本试剂盒所用的 MMLV 逆转录酶为 RNase H 缺失突变，故合成 cDNA 片段长度可达 12 kb?；鼓苡糜?GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板。

5.本产品规格足够 50 次 20uL 体系的 RT 反应。

6.除 gDNA RT 试剂盒只用于科研。

产品参数：

成份规格包装

5×RT Buffer200uL0.5mL 绿盖管

抗污染 MMLV 逆转录酶50uL0.5mL 红盖管

随机引物(0.2 ug/uL)50 uL0.5mL 黄盖管

10mM dNTP20 uL0.5mL 蓝盖管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存, 有效期一年。

自备试剂

RNA 模板。

使用方法：

1.在一个干净的无 RNase 反应管管中加入 RNA 模板，不超过 13uL。RNA 模板种类加入量

总 RNA100-500 ng

或 poly(A) mRNA10-500 ng

或专一的 RNA0.01 pg-500 ng

2.加入 4 uL 4×RT Buffer。

3.再加入 1 uL 抗污染 MMLV 逆转录酶。常温放置 30 分钟去除gDNA。

4.按下表加入引物：

引物种类加入量

或随机引物(0.2 ug/uL)1 uL

或 RNA 模板专一性引物1 uL（20 pmol）

注意：随机引物与 RNA 模板的比例跟 cDNA 合

成的平均长度成反比。

5.加入 1uL 10mM each 的dNTP。加入引物和dNTP 后必须马上进入后续操作， 不要放置。

6.最后补水使得总体积为 20uL。

7.37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保温 5 分钟。但如果使用随机引物，由于其很短，则改成 25℃ 5 分钟以便其跟 RNA 结合。

8.42℃保温 60 分钟。但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，待合成了一段 cDNA 后，然后再转移到 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。

9.70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，不需要纯化。

10.轻轻吹打混匀，短暂离心，37℃保温 60 分钟进行抗污染逆转录。

11.95℃10 分钟加热灭活相关酶，短暂离心，直接作为模板用于后续常规 PCR、染料法 qPCR 或探针法 qPCR 实验，或者长期放-20℃待用。用于后续 PCR 时，

一般使用量不超过终体积的 1/10，具体需要根据各厂家的PCR 试剂盒确定。

选择我们的除 gDNA RT 试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！