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产品简介：

本试剂盒用于质粒 DNA 小量制备与纯化?；诟牧己蟮募畋湫苑?，用碱使基因组 DNA 和质粒 DNA 均变性，再用酸中和，质粒 DNA 可以快速复性，而基因组 DNA 不能快速复性，故可以通过离心去除。除去基因组 DNA 后的含质粒DNA 的上清用离心吸附柱吸附质粒 DNA，洗去杂质，即可得到纯化的质粒 DNA。

产品特点：

1.快速、步骤少，整个操作在 30 分钟左右完成。

2.不需要预平衡离心吸附柱。

3.通用洗柱液即开即用，不需要用户额外加乙醇。

4.溶液 B 中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。

5.产量高，一次可以处理 1-4mL 过夜培养的 G+菌液，每毫升过夜培养的细菌可以提取到 2-5μg/mL（取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝）。

6.本产品足够 50 次微量提取。

7.纯度高，采用本试剂盒提取的质粒 OD 比值在 1.8-2.0 之间，可以直接用于酶切、转化、测序及 PCR 等。

8.质粒DNA纯化试剂盒（过柱法）只能用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

常温运输和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

无

使用方法：

1. 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养 12-16 小时（摇床转速 200-300）。注意：建议使用 LB 培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统的处理能力而降低质粒 DNA 的质量。

另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒 DNA 浓度降低。

2.用 1.5mL 离心管收集 1-4mL 过夜培养饱和菌液，室温 12,000rpm 离心 1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。

3.第一次使用本试剂盒时，先将本试剂盒提供的全部 RNase A 溶液加入到质粒 DNA 纯化溶液 A（简称溶液 A，下同）中，摇匀后再取用，未用完的溶液 A 放 4℃保存。

4.加入 250μL 溶液 A 到第 2 步得到的细菌沉淀中，用枪头充分吹打使菌体重悬。注意：细胞未充分悬浮会影响后续碱变性，可以使用漩涡振荡器混匀或  使用枪头吸头吹打沉淀至完-全混匀。

5.加入 250μL 质粒DNA 纯化溶液 B（下面简称溶液 B，如果溶液 B 在低温放置产生沉淀，须 37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和颠倒 4-6 次混匀，蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠。注意：千万不要剧烈振荡，否  则基因组 DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒 DNA。

6.冰上放置不超过 5 分钟。注意：冰上放置不要超过 5 分钟，否则质粒 DNA 会有碱损伤。溶液 B 用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的碱，降低其效率。如果溶液 B 颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且跟厂家联系。

7.加入 350μL 冰上预冷的质粒DNA 纯化溶液C（下面简称溶液 C），温和反复颠倒 4-6 次，溶液将变成无色，将有白色絮状沉淀产生。

8.冰上放置至少 5 分钟让质粒 DNA 复性。不能短于 5 分钟，一般 10 分钟。

9.12,000rpm 离心 3 分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，部分絮状物悬浮在上清液中属正常现象，吸取上清时避开这  些悬浮物即可。如果此步的离心在 4℃进行，可减轻沉淀物漂浮。

10.静置 2 分钟以让质粒 DNA 与离心吸附柱充分结合。

11.室温 12,000rpm 离心 1 分钟，弃收集管中的废液。

12.加入 500μL 的通用洗柱液到离心吸附柱中，室温 12,000rpm 离心 1 分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要将盖拧紧存放，  否则乙醇会挥发。

13.重复上步 1 次。

14.室温 12,000rpm 离心 1 分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响 DNA 的后续使用（如残留乙醇使 DNA 溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中）。

15.将离心吸附柱置于一个新的 1.5mL 塑料离心管（自备）中，加入 30-100μ L65-80℃预热的 DNA 洗脱液（基因组 DNA 专用），室温放置 2 分钟。

16.室温 12,000rpm 离心 1 分钟，离心管底溶液即质粒 DNA 溶液。

选择我们的质粒DNA纯化试剂盒（过柱法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！