在細(xì)胞代謝研究與臨床診斷領(lǐng)域，乳酸檢測(cè)扮演著關(guān)鍵角色。精準(zhǔn)把握乳酸檢測(cè)工作原理，有助于科研人員與醫(yī)務(wù)工作者更好地運(yùn)用相關(guān)技術(shù)。
乳酸檢測(cè)始于樣本采集。血液、組織勻漿、培養(yǎng)上清等常見(jiàn)樣本，各有其采集規(guī)范。以血液為例，需采用專用采血管，避免細(xì)胞代謝持續(xù)改變?nèi)樗釢舛?。采集后，樣本需及時(shí)離心，分離出血清或血漿，此過(guò)程溫度控制至關(guān)重要，低溫環(huán)境可抑制細(xì)胞殘余活性，防止乳酸濃度在檢測(cè)前發(fā)生偏移。對(duì)于組織樣本，精確稱重后加入相應(yīng)比例的預(yù)冷生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，使用勻漿器充分研磨，制備成均勻懸液，隨后離心取上清，確保后續(xù)檢測(cè)體系均一性。
乳酸檢測(cè)試劑盒核心在于構(gòu)建精準(zhǔn)反應(yīng)體系。體系中，乳酸氧化酶是關(guān)鍵酶。當(dāng)樣本中乳酸與乳酸氧化酶接觸，氧化反應(yīng)瞬間啟動(dòng)。乳酸作為底物，被氧化生成丙酮酸，此過(guò)程伴隨電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生過(guò)氧化氫。這看似簡(jiǎn)單反應(yīng)，實(shí)則對(duì)反應(yīng)條件極為敏感。體系 pH 值需嚴(yán)格調(diào)控在 7.0 - 7.4 之間，偏離此范圍，乳酸氧化酶活性將呈拋物線式下降。溫度亦然，37℃是多數(shù)試劑盒設(shè)定的黃金溫區(qū)，溫度波動(dòng) ±2℃，酶促反應(yīng)速率會(huì)偏離標(biāo)準(zhǔn)曲線 ±15%，直接干擾檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。
生成的過(guò)氧化氫需轉(zhuǎn)化為可被儀器捕捉的信號(hào)?；谏孜镲@色法是經(jīng)典途徑。過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶催化下，將無(wú)色色原底物氧化為有色產(chǎn)物。此有色物質(zhì)光吸收特性是定量關(guān)鍵。分光光度計(jì)登場(chǎng)，特定位點(diǎn)波長(zhǎng)（多為 500 - 550nm）下，光束穿透反應(yīng)溶液，部分光被有色分子吸收。儀器精準(zhǔn)測(cè)量吸光度值，依據(jù)朗伯 - 比爾定律，吸光度與乳酸初始濃度呈線性關(guān)系，線性范圍 typically 在 0.1 - 10mmol/L，超出此區(qū)間，反應(yīng)體系可能因底物過(guò)量或酶飽和，導(dǎo)致結(jié)果失真。
然而，生物樣本復(fù)雜性使檢測(cè)面臨干擾。內(nèi)源性抗壞血酸、尿酸，外源性藥物酚類成分，均能模擬過(guò)氧化氫效應(yīng)，造成吸光度虛高。優(yōu)秀試劑盒會(huì)添加特異性干擾抑制劑，如抗壞血酸氧化酶可特異性清除抗壞血酸，猶如為反應(yīng)體系安裝精準(zhǔn) “過(guò)濾網(wǎng)"。同時(shí)，反應(yīng)體系離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑發(fā)揮作用，維持離子平衡，避免鈣、鎂離子與試劑成分形成絡(luò)合物，沉淀于反應(yīng)容器壁，干擾光信號(hào)傳輸。
為確保每批次檢測(cè)可靠性，質(zhì)控品全程陪伴。低、中、高三個(gè)濃度質(zhì)控品，分別代表臨床常見(jiàn)樣本濃度區(qū)間。檢測(cè)流程中，質(zhì)控品與樣本同步經(jīng)歷反應(yīng)體系構(gòu)建、信號(hào)轉(zhuǎn)換捕捉。其結(jié)果猶如檢測(cè)系統(tǒng)的 “健康報(bào)告"，若低濃度質(zhì)控品偏差超 ±10%，提示試劑敏感性下滑；高濃度偏差超 ±8%，暗示酶活性或抗體結(jié)合力衰減，此時(shí)檢測(cè)數(shù)據(jù)需謹(jǐn)慎評(píng)估，及時(shí)追溯問(wèn)題源頭，是儀器光路漂移，還是試劑儲(chǔ)存不當(dāng)，都需排查。
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