D-乳酸脫氫酶(D-LDH)是一種關(guān)鍵的糖酵解酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,尤其在腎臟中含量較高。它在生物體內(nèi)參與 D-乳酸與丙酮酸之間的相互轉(zhuǎn)化,并伴隨著 NADH 和 NAD?的相互轉(zhuǎn)化。這一酶的活性檢測對于研究細胞代謝、腸道菌群代謝以及疾病診斷等具有重要意義。CheKine™ D-乳酸脫氫酶(D-LDH)活性檢測試劑盒(微量法)以其性能,為科研人員提供了一種高效、精準的檢測手段。
D-LDH 的生理功能與作用機制
D-LDH 在糖酵解和糖異生過程中發(fā)揮著重要作用。它催化 D-乳酸與丙酮酸之間的可逆轉(zhuǎn)化,同時伴隨著 NADH 和 NAD?的相互轉(zhuǎn)變。在無氧條件下,D-LDH 將丙酮酸轉(zhuǎn)化為 D-乳酸,為細胞提供能量來源。此外,D-LDH 還在維持細胞內(nèi)氧化還原平衡中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在腸道菌群代謝中,某些有益菌群(如雙歧桿菌)通過 D-LDH 代謝 D-乳酸,有助于維持腸道的酸性環(huán)境,抑制有害菌的生長。
D-LDH 與疾病的關(guān)系
乳酸酸中毒
D-LDH 活性的異常升高可能導致乳酸酸中毒。在缺氧、線粒體功能障礙或某些遺傳性疾病中,D-LDH 的活性可能會增加,導致 D-乳酸在體內(nèi)積累,進而引發(fā)酸中毒。檢測 D-LDH 活性有助于早期診斷和監(jiān)測這些疾病。
腸道疾病
D-LDH 活性與腸道菌群的代謝狀態(tài)密切相關(guān)。在炎癥性腸病(IBD)等腸道疾病中,腸道菌群失衡可能導致 D-LDH 活性改變。檢測糞便或血液中的 D-LDH 活性,可以評估腸道菌群的狀態(tài)和腸道屏障功能,為疾病的診斷和治療提供重要參考。
CheKine™ D-LDH 活性檢測試劑盒(微量法)工作原理
CheKine™ D-乳酸脫氫酶(D-LDH)活性檢測試劑盒采用比色法原理,利用 D-LDH 催化 D-乳酸與 NAD?反應生成丙酮酸和 NADH。NADH 在 340 nm 處具有強吸收峰,通過分光光度計測量吸光度值的變化,即可定量檢測 D-LDH 活性。該試劑盒具有操作簡便、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點,適用于多種生物樣本,包括動植物組織、血清(漿)等。
操作使用要點
樣本準備與處理
對于血清樣本,需使用適當?shù)目鼓齽┎杉?,并及時分離血清,避免溶血和細胞破裂釋放 D-LDH 影響檢測結(jié)果。組織樣本需準確稱量后,利用適當?shù)木彌_液進行勻漿處理,確保細胞充分破裂釋放 D-LDH。細胞培養(yǎng)上清樣本則需注意收集時間,確保 D-LDH 活性在檢測范圍內(nèi)。
檢測步驟
嚴格按照試劑盒說明書的操作步驟進行。首先將樣本和標準品分別加入試劑盒的反應孔中,然后依次加入檢測試劑,充分混勻后在特定溫度下孵育一定時間。孵育完成后,使用分光光度計在 340 nm 處測量吸光度值,并根據(jù)標準曲線計算樣本中 D-LDH 的活性。
質(zhì)量控制與結(jié)果分析
每次檢測應設(shè)置空白對照、陰性對照和陽性對照,以確保檢測結(jié)果的準確性。對已知濃度的標準品進行重復檢測,計算其變異系數(shù)(CV),一般要求 CV 控制在一定范圍內(nèi),如小于 10%,以確保實驗數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復性。
試劑盒選擇要點
檢測原理與方法對比
目前市面上有多種 D-LDH 活性檢測試劑盒,采用不同的檢測原理,如比色法、熒光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等。CheKine™ 試劑盒采用的比色法具有操作簡便、成本較低、檢測快速等優(yōu)點,適合大多數(shù)實驗室常規(guī)使用。熒光法具有較高的靈敏度和特異性,但需要配備熒光光度計;ELISA 法操作相對復雜,檢測時間較長。因此,在選擇試劑盒時,應根據(jù)實驗室設(shè)備條件、實驗需求以及對檢測靈敏度和速度的要求,綜合考慮檢測原理的適用性。
樣本類型與適用范圍
CheKine™ 試劑盒適用于多種生物樣本,包括動植物組織、血清(漿)等。但在選擇試劑盒時,需仔細閱讀說明書,確保其與所檢測的樣本類型相匹配。例如,某些試劑盒可能僅適用于特定動物種屬的樣本或特定類型的細胞培養(yǎng)上清,以保證檢測結(jié)果的準確性和可靠性。
靈敏度與檢測范圍評估
試劑盒的靈敏度和檢測范圍是影響檢測結(jié)果準確性的關(guān)鍵因素。CheKine™ 試劑盒具有較寬的檢測范圍和較高的靈敏度,能夠檢測到樣本中較低濃度的 D-LDH 活性變化。在選擇試劑盒時,應了解其檢測靈敏度和范圍,并結(jié)合實驗中預期的樣本 D-LDH 活性水平進行選擇。若試劑盒靈敏度不足,可能導致低濃度 D-LDH 樣本的檢測結(jié)果不準確或假陰性,從而影響對疾病早期診斷或代謝狀態(tài)的評估。
試劑盒品質(zhì)與穩(wěn)定性考量
選擇質(zhì)量可靠、穩(wěn)定性好的 D-LDH 活性檢測試劑盒對于保證檢測結(jié)果的準確性和重復性至關(guān)重要。在購買前,可查看試劑盒的用戶評價、相關(guān)文獻引用情況以及生產(chǎn)廠家的信譽和資質(zhì)等信息,對試劑盒的質(zhì)量和性能進行評估。該試劑盒經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制和性能驗證,具有良好的穩(wěn)定性和批次間一致性,能夠為科研人員提供穩(wěn)定可靠的檢測結(jié)果。同時,注意試劑盒的保存條件和有效期,嚴格按照說明書要求進行保存和使用,以確保試劑的活性和性能不受影響。
立即詢價
您提交后,專屬客服將第一時間為您服務(wù)