磷脂酶C（ Phospholipases C，PLC ）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯 C3 位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

测定原理：

磷脂酶C 催化水解NPPC 产生对硝基ben酚，在 410nm 处有特征吸收峰。

磷脂酶C试剂盒   脂肪酸系列-常备现货

组成：

自备仪器和用品：

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

酶液提?。?/span>

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1ml 试剂一。

3. 血清：直接测定。

测定操作：

酶活计算公式：

标准曲线：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991

1. 按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC 活性（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ W

3. 按照细胞数量计算

酶活性定义：每 10⁴ 个细胞每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC 活性（nmol/min/10⁴ cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷V 样÷T

= 17.45×（△A+0.0103）

V 反总：反应总体积，1ml；V 样：加入样本体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min

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