联系电话
上海语纯生物科技有限公司
初级会员·1年
具体成交价以合同协议为准
产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 货号 | EC96306 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药/生物制药 |
产品货号：EC96306
产品规格：10 ×50ul/100×50ul
本产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗。
产品介绍
EHA101感受态（电转）
产品简介
EHA101
菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签
——利福平抗性基因Rif，为了便于转化操作，
此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型
Ti 质粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir 基
因 (vir 基因是
T-DNA 插入植物基因组必需的元件，
pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T
DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体
T-DNA 顺利转移)。pEHA101 (pTiBo542DT
DNA)
型 Ti 质粒含有筛选标签：
Kan，赋予 EHA101 菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草
等植物的转基因操作。
本公司
开发的 EHA101 电转感受态特别适用于大质粒的转化：经 pK7WGF2
质粒
(壮观霉素抗性，
size:11876 bp)检测转化效率>105cfu/μg DNA。
产品组成
组分
EHA101
电转感受态细胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58
(RifR ) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR ) Nopaline
存储条件
-80 ℃
保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除胭脂碱型 Ti 质粒 pEHA101 外，无外源质粒 DNA 残留；
电转法转化效率
≥105cfu/μg
DNA。
使用方法
1. 将新的
2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于
75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工
作台中将其倒
置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，
然后插入冰中预冷；
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入
0.01-1 μg质粒 DNA（体积不大于 5 μl），用 200
μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；
3. 开启电转仪，设置参数（2500 V ，200 Ω，25 μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插
入冰中，加入 900 μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。
（注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平
板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天（当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养 48 小时
即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有 50
μg/ml rif 则需要 28℃培养 72-90 小时）。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 利福平浓度不应高于 25 μg /μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。
EHA101感受态（电转）
相关产品
-
￥面议
