T4 DNA Ligase催化双链DNA或RNA中毗邻的5'-磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键。酶还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但是该酶对单链核酸无酶活性。
T4 DNA Ligase需要辅因子ATP。
特点
- 快速–室温下10分钟内完成粘末端的连接反应。
- 该酶在Thermo Scientific限制性内切酶、PCR和RT缓冲液(添加ATP)中有活性。
- 配套提供聚乙二醇溶液，以高效进行平末端连接。
应用
- 克隆酶切产生的DNA片段。
- 克隆PCR产物。
- 连接双链寡聚核苷酸街头或连接物。
- 定点诱变。
- 扩增片段长度多态性 (AFLP)。
- 连接酶介导的 RNA 检测。
- 双链DNA，RNA 或 DNA/RNA 复合体中缺口的修复。
- 线性DNA自身环化。
浓度
1 Weiss u/µl = 200 CEU*/µl
5 Weiss u/µl = 1000 CEU*/µl
30 Weiss u/µl = 6000 CEU*/µl
* 一个粘性末端连接单位的是指在16°C 、30分钟内50%连接HindIII酶切的lamda DNA产物所需要的酶的量。
来源
含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌。
分子量
55.3 kDa，单体。
活性单位定义
1个活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37°C、20分钟内将1nmol [
32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。
酶活性分析混合物：66 mM Tris-HCl (pH 7.6), 6.6 mM MgCl2, 0.066 mM ATP, 10 mM DTT, 3.3 micro Mol [32PPi]
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA和50% (v/v)甘油。
10X T4 DNA Ligase 缓冲液(#B69)
400 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP (pH 7.8, 25°C)。
质量控制
相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。 功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力。
抑制与失活
- 抑制剂：当反应体系中NaCl或KCl的浓度超过200??mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性。
- 失活：65°C加热10分钟或者70°C加热5分钟。
备注
- 聚乙二醇(PEG) 极大地增加平末端连接效率 (5) 。反应体系中的PEG 4000的建议浓度为5% (w/v)。
- T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率。为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理方法如下：样本或分子量标准与Fermentas公司6X DNA Loading Dye & SDS溶液(#R1151)混合；70°C加热5分钟或65°C加热10分钟后冰浴保存。
- 转化时，连接产物的体积不能超过感受态细胞体积的10%。
- 电转化之前，先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase。然后经乙醇沉淀纯化抽提产物。
订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| EL0014 | T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) | 200 U |
| EL0011 | T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) | 1,000 U |
| EL0012 | T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) | 5 x 1,000 U |
| EL0013 | T4 DNA Ligase, HC (30 U/µL) | 5000 U |
| EL0016 | T4 DNA Ligase, LC (1 U/µL) | 2x500 U |
了解更多信息，/order/catalog/product/EL0011。
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