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一、产品概述
Roche LightCycler 480 是一款适用于中高通量实验室的实时荧光定量 PCR（qPCR）平台，支持 96 孔和 384 孔板两种格式。其?？榛杓平岷细呔任驴赜攵嗤ǖ烙饧觳?，可灵活配置实验方案，并兼容多种荧光染料和探针。LightCycler 480 广泛应用于基因表达分析、病原体检测、表观遗传学研究、SNP 分型及拷贝数变异检测等领域。
二、系统架构与硬件组成
机箱与尺寸
外壳采用金属与抗腐蚀涂层，尺寸约 50 cm×58 cm×54 cm，适合实验台或安装架放置；
净重约 30 kg，设计有可拆卸顶盖，便于维护与清洁。
温控?？?/strong>
半导体制冷加热（Peltier）技术，支持 4 °C–99 °C 温度范围；
温度控制精度 ±0.1 °C，均一性 ≤ 0.2 °C；
升温速率最高可达 4 °C/s，降温速率约 3 °C/s。
光学检测单元
激发源：多色 LED，包括蓝（470 nm）、绿（530 nm）、黄（590 nm）和红（630 nm）光区；
检测器：光电二极管阵列（PMT），信噪比可达 1:1000；
通道切换：自动滤光片切换，延迟 < 8 ms；
支持 FAM、HEX/VIC、ROX/TAMRA、Cy5、Cy3 等多种染料组合。
板式适配
标配 96 孔板架；可选配 384 孔板适配器，单次检测量提升 4 倍；
兼容条管、单管及定制微流控芯片。
控制与接口
高分辨率触摸屏面板，实时显示扩增曲线与熔解曲线；
PC 端软件通过 USB 2.0、LAN 或 RS-232 接口连接；
支持远程监控与实验室信息管理系统（LIMS）对接。
三、关键性能指标
| 性能指标 | 技术参数 |
|---|---|
| 温度控制精度 | ±0.1 °C |
| 温度均一性 | ≤ 0.2 °C |
| 最大升温速率 | 4 °C/s |
| 最大降温速率 | 3 °C/s |
| 荧光通道数 | 最多 5 通道（可?。?/td> |
| 检测灵敏度 | 单拷贝水平 |
| 定量线性范围 | 101–10? copies |
| 线性回归系数 (R2) | ≥ 0.995 |
| 板式通量 | 96 孔/板（标配），384 孔/板（选配） |
| 数据输出格式 | CSV、Excel、PDF、JPEG、PNG |
| 通讯接口 | USB 2.0 ×2，LAN ×1，RS-232 ×1 |
| 电源要求 | AC 100–240 V，50/60 Hz |
| 工作环境 | 温度 15–30 °C，湿度 20–80% （无冷凝） |
| 功耗 | 工作时 ≤ 250 W；待机 ≤ 10 W |
四、软件平台与数据分析
实验设计
向导式界面引导设置板架布局、引物/探针通道及扩增程序；
支持梯度 PCR 设计，一次试验可同时测试 6–12 个退火温度；
模板管理功能，可保存、导入、导出实验模板，减少重复操作。
实时监控
实时扩增曲线与 Ct 值自动计算；
多种显示模式（叠加模式、分组对比模式）便于多板实验评估；
实时熔解曲线、荧光强度变化曲线。
数据处理
定性分析：阈值循环数（Ct）判定，自动筛选异常点；
相对定量：ΔΔCt 法或 Pfaffl 法，预设多种内参基因库；
绝对定量：标准曲线法，支持自动绘制并拟合；
多重分析：不同通道荧光分离，支持最多 4–5 重检测；
熔解曲线分析：可视化产物特异性，检测引物二聚体或非特异扩增。
报告与导出
自定义报告模板，包含实验信息、图表和统计汇总；
批量导出功能，一键生成多实验报告；
数据加密与用户权限管理，满足 GLP/GMP 规范需求。
五、典型应用领域
基因表达定量
适用于细胞因子、受体、转录因子等基因表达差异分析；
荧光染料与探针双重标记，针对低丰度转录本也可获得稳定 Ct 值。
病原体核酸检测
病毒、细菌、真菌等病原微生物定性与定量；
可配置快速扩增程序，初步结果可在 30–40 min 内获取。
拷贝数变异与 SNP 分型
使用 TaqMan 探针或 HRM（高分辨率熔解曲线）技术；
定量检测基因组扩增或缺失事件，支持 CNV 分析；
基于熔解曲线差异识别单核苷酸多态性（SNP）。
表观遗传学分析
甲基化特异 PCR（MSP）与甲基化敏感探针分析；
结合亚硫酸盐转换后 DNA，定量评估甲基化水平。
转基因及 GMO 检测
针对常见转基因片段（35S、NOS、Bar 等）进行定量；
符合食品安全和监管机构标准，如 ISO 21569。
六、日常操作与维护
开关机流程
开机：连接电源与网络，启动软件后执行系统自检；
关机：在软件中安全退出后断电，避免数据丢失。
试剂与耗材
推荐使用低漂白或无漂白板材及专用封板膜；
荧光探针、引物等反应体系需在 ?20 °C 存储并在室温平衡后使用。
清洁与消毒
每次实验后，用无尘布或镜头纸擦拭光学窗口；
定期用 70% 乙醇擦拭样本架底板及盖板；
避免液体进入机箱风道和电子部件。
校准与质控
温度校准：每 6 个月使用校准板或标准试剂验证；
光学校准：采用标准荧光染料，检查各通道灵敏度与线性度；
软件更新：定期检查并安装新版固件与分析软件。
故障排查
软件错误：参考日志文件或重安装软件；
硬件报警：根据错误代码手册执行清洁或更换部件；
无法升温或温差过大：检查 Peltier ?？榧吧⑷确缟?。
七、二手设备验收要点
外观与机械部件
检查机箱无明显碰撞痕迹；
样本架与盖板运动顺畅，无卡滞。
温控与光学测试
执行标准梯度 PCR，记录升降温曲线与均一性；
利用荧光板及阴性对照检测信噪比与线性范围。
软件功能验证
创建新实验、加载模板、运行扩增并导出报告；
检查网络连接和远程监控功能。
配件与文档
样本架、封板膜、电源线、通信线、软件授权文件齐全；
提供最近一次校准报告及使用手册。
八、典型用户案例
大学与研究所：
在肿瘤标志基因表达分析项目中，同步比较 20+ 个基因，月平均运行 200 板次，结果重现性良好。第三方检测机构：
用于转基因作物成分定量分析，满足 ISO/IEC 17025 认证。公共卫生实验室：
实施呼吸道病原体监测，流感高峰期单日检测可达 800 例样本。
九、采购及配件建议
通量选择
日常通量 < 50 板/月：标准 96 孔版；
通量 > 200 板/月：建议选配 384 孔适配器及自动上板装置。
配件选配
梯度?？?/strong>：用于引物退火温度优化；
自动化接口：与液体处理机器人对接，减少手动操作。
软件授权
标配基础分析?？椋?/p>
可选 LIMS 接口、统计插件（PCA、聚类分析等）。
预算考量
全新机型与二手设备在初期投入有差异；
建议根据项目周期与预算综合评估。
十、售后与技术支持
质保期
核心部件（温控、光学） 6 个月；
耗材及附件 3 个月。
培训服务
包括仪器安装、软件操作、日常维护与故障排查；
可安排现场或远程培训。
技术支持
远程诊断：实时监控运行状态；
现场服务：签订协议后 48 小时内响应（限主要城市）；
定期校准与升级服务套餐亦可选购。
通过系统化的硬件设计、软件功能和多领域应用验证，LightCycler 480 能满足科研、临床及检测机构的多种需求。