濃縮質(zhì)粒的異丙醇沉淀法
質(zhì)粒大抽后，通常所得質(zhì)粒濃度為0.1-0.3mg/ml左右，可以用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。但是如果想得到高濃度的質(zhì)粒，可以采用如下的異丙醇沉淀方法濃縮質(zhì)粒。
加入0.7倍體積的常溫異丙醇(例如1毫升待濃縮質(zhì)粒中加入0.7毫升異丙醇)，混勻后1,2000-14,000rpm 4℃離心10分鐘，小心吸去上清液，避免觸及沉淀。
如果希望獲得較高濃度的質(zhì)粒，在洗脫時(shí)推薦采用1毫升洗脫液進(jìn)行洗脫，后續(xù)可以轉(zhuǎn)移到2毫升離心管內(nèi)進(jìn)行異丙醇沉淀，這樣操作起來(lái)相對(duì)比較方便。
異丙醇沉淀的DNA為玻璃狀近透明的顆粒狀沉淀，和乙醇沉淀產(chǎn)生的含鹽沉淀物相比較難觀(guān)察清楚。離心后取放離心管要盡量輕柔，避免沉淀松動(dòng)或部分顆粒狀懸浮至溶液中。
不推薦直接倒棄上清，直接倒棄上清時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)直接把質(zhì)粒沉淀倒掉的情況；如果偏好直接倒棄上清，建議把上清倒棄至一潔凈離心管內(nèi)，這樣萬(wàn)一沉淀被倒出，仍然可以從潔凈離心管中回收
。推薦用移液槍吸去上清，并注意盡量避免吸走沉淀。
加入1毫升常溫70%乙醇溶液，輕輕懸起質(zhì)粒沉淀以充分洗滌，12,000-14,000rpm 4℃離心5-10分鐘，小心吸去上清液，避免觸及沉淀。
5,000-10,000rpm 4℃離心5-10秒，用20微升或200微升移液器小心吸凈殘留液體，避免觸及沉淀。
肉眼觀(guān)察無(wú)明顯液體后(吸凈液體后通常在1分鐘內(nèi)即可完成干燥)，加入適當(dāng)體積的溶液(如溶液V、10mM Tris-Cl pH8.5或Milli-Q級(jí)純水)溶解DNA。
DNA樣品不能過(guò)于干燥，否則很難溶解。最好在弱堿性條件下溶解DNA，溶解時(shí)可用緩沖液反復(fù)沖洗管壁，使管壁上的DNA充分溶解。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
2
立即詢(xún)價(jià)
您提交后，專(zhuān)屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)