2000型氨基酸分析儀通過離子交換色譜與柱后茚三酮衍生技術(shù)，可實現(xiàn)食品、生物樣本中17種常見氨基酸的高精度定量分析。本文以蛋白質(zhì)樣品檢測為例，系統(tǒng)梳理其操作步驟與關(guān)鍵注意事項。
一、樣品前處理：水解與衍生化
1.蛋白質(zhì)水解
稱取100 mg蛋白質(zhì)樣品置于水解管中，加入10 mL 6N鹽酸及3-4滴苯酚，抽真空至0 Pa后充入高純氮氣，重復(fù)三次后封口。
在110°C恒溫干燥箱中水解24小時，冷卻后過濾并定容至50 mL。取1 mL濾液于60°C真空蒸發(fā)至干，用0.02N鹽酸稀釋至200 μg/mL，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后備用。
2.游離氨基酸處理
對于血清等液體樣品，直接用4%磺基水楊酸按1:3比例混合，4°C、10000 rpm離心15分鐘，取上清液稀釋至200 μg/mL并過濾。
二、儀器準(zhǔn)備與校準(zhǔn)
1.開機(jī)與檢查
啟動儀器電源，檢查氮氣壓力（0.05-0.1 MPa），確保緩沖液（A、B、C、D）及茚三酮溶液余量充足。
若儀器閑置超過1個月，需用吹風(fēng)機(jī)對進(jìn)樣盤及衍生模塊除濕，并更換進(jìn)樣針清洗液（10%甲醇水）。
2.參數(shù)設(shè)置
通過EZChrom Elite軟件建立分析序列，設(shè)置進(jìn)樣體積為20 μL，柱溫58°C，流速0.45 mL/min。
配置梯度洗脫程序：0-10分鐘用緩沖液A（pH 2.2），10-30分鐘線性切換至緩沖液B（pH 3.3），30-50分鐘切換至緩沖液C（pH 4.0）。
三、樣品分析與數(shù)據(jù)采集
1.進(jìn)樣與檢測
將標(biāo)準(zhǔn)品與樣品按順序放入自動進(jìn)樣器，啟動序列運(yùn)行。儀器自動完成離子交換分離、柱后茚三酮衍生（115°C反應(yīng)）及光度檢測（570 nm主波長，440 nm副波長）。
2.數(shù)據(jù)處理
通過軟件校準(zhǔn)保留時間，刪除雜質(zhì)峰并添加目標(biāo)峰，輸入樣品總量（mg）及稀釋度。
生成報告時，系統(tǒng)自動計算氨基酸濃度（μmol/L）及回收率（95%-105%），支持導(dǎo)出Excel或PDF格式。
四、維護(hù)與故障排除
1.日常維護(hù)
每日用超純水清洗泵及反應(yīng)管路，每周更換色譜柱保護(hù)柱芯，每月校準(zhǔn)儀器線性度（R2≥0.999）。
2.常見問題處理
若基線漂移，檢查茚三酮溶液是否氧化（需現(xiàn)配現(xiàn)用）；若峰形拖尾，清洗離子交換柱（用0.1N NaOH沖洗30分鐘）。
2000型氨基酸分析儀通過標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，可實現(xiàn)ppb級檢測限與±1% RSD的重復(fù)性。從樣品水解到數(shù)據(jù)輸出，每一步均需嚴(yán)格遵循參數(shù)設(shè)置與質(zhì)量控制要求，以確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
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