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貨物所在地：天津天津市
更新時(shí)間：2025-05-26 16:06:54
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貨號(hào)： HG-BE001
全能核酸酶 ELISA 檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中核酸酶的殘留含量。
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)測(cè)定樣品中全能核酸酶（以下簡(jiǎn)稱(chēng)核酸酶）的微量殘留。用捕獲抗體包被 96 孔酶標(biāo)板，制成固相抗體，隨后加入標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)樣品，再加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的標(biāo)記抗體，形成一個(gè)固相抗體-核酸酶-標(biāo)記抗體的三明治結(jié)合物，反應(yīng)結(jié)束后洗滌，然后加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，底在HRP的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在終止液的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算待測(cè)樣品中核酸酶的含量。
96 T
備注：試劑保存溫度為2~8℃，顯色液A和顯色液B應(yīng)避光保存。
| 組分 | 規(guī)格 | 配制 |
|---|---|---|
| Nucleases Coated Plate ( 包被酶標(biāo)板 ) | 8×12條 | -20℃ |
| Nucleases Standard ( 標(biāo)準(zhǔn)品 ) | 100μL×1管（0.5μg/mL） | 按建議稀釋方式操作 |
| Anti-Benzonase (酶標(biāo)抗體) | 15mL×1瓶 | 即用型 |
| Sample Diluent Buffer (樣品稀釋液) | 30mL×1瓶 | 即用型 |
| 20×Wash Buffer (20×洗液） | 30mL×1瓶 | 按建議稀釋方式操作 |
| Color Reagent A (顯色液A) | 8mL×1 瓶 | 即用型 |
| Color Reagent B (顯色液B) | 8mL×1 瓶 | 即用型 |
| 封板膜 | 5張 | 即用型 |
| 說(shuō)明 | 1份 | / |
未開(kāi)封的試劑盒， 2-8℃條件下有效期為12個(gè)月。
1. 酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板恒溫振蕩器或恒溫培養(yǎng)箱、洗板機(jī)。
2. 高精度移液器及一次性吸頭（0.5-10µL、10-100µL、30-300µL、100-1000µL）。
3. 去離子水、吸水紙、 EP管。
1.1×洗液：取洗液（20×）1份，加19份去離子水配制成工作濃度洗液（1×）。洗液（20×）中如果有結(jié)晶形成，應(yīng)置于室溫或37℃水浴輕輕搖晃，待結(jié)晶完i全溶解后再進(jìn)行稀釋。未用完的洗液（20×）應(yīng)置于2-8℃儲(chǔ)存。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：用樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至5ng/mL，然后用2.5倍倍比稀釋的方法配制標(biāo)準(zhǔn)品。
3. 底物液的配制：使用前i十分鐘將顯色液A、顯色液B等體積混合，避光。確保底物液不被污染，如混合后的底物液已經(jīng)變藍(lán)，請(qǐng)勿使用。
詳見(jiàn)樣品前處理試劑盒（貨號(hào)為HG-CL100）操作說(shuō)明書(shū)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：用樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至5ng/mL，然后用2.5倍倍比稀釋的方法配制標(biāo)準(zhǔn)品，如下圖：
3. 樣品溫育：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔按順序加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品100µL，空白孔加入樣品稀釋液100µL，樣本孔中加入待測(cè)樣本100µL，用封板膜封板，然后置于37℃溫育1h。
4. 洗板：棄去孔中液體，用1×洗液洗板3次（250µL/孔），拍干樣品孔中的殘留液體。（每次加入洗液后，如采用手洗板，加洗液后可靜置1min并輕微震蕩；如采用洗板機(jī)洗板，加洗液后可輕微震蕩5s。）
5. 酶標(biāo)抗體溫育：每孔加入100µL酶標(biāo)抗體，用封板膜封板，然后置于37℃溫育1h。
6. 洗板：同步驟4。
7. 顯色：將預(yù)先配置好的底物液加入酶標(biāo)板中，混勻（100µL/孔），用封板膜封板， 37℃避光溫育15min。
8. 終止：加入終止液， 100µL/孔。
9. 讀數(shù)：在酶標(biāo)儀中測(cè)定雙波長(zhǎng)450/630nm處的OD值，測(cè)定應(yīng)在終止后20min內(nèi)完成。
以核酸酶標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（OD450nm-OD630nm）為因變量Y，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為自變量X做曲線(xiàn)。推薦使用四參數(shù)Logisitic數(shù)學(xué)模型擬合方程： Y=((A-D)/(1+(x/C)^B))+D，以樣品OD值（OD450nm-OD630nm）代入公式計(jì)算樣品中核酸酶的含量）。
| 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL) | O D 值 ( 1 ) | O D 值 ( 2 ) | 平均值 |
| 5 | 1.925 | 1.774 | 1.849 |
| 2 | 0.917 | 0.865 | 0.891 |
| 0.8 | 0.447 | 0.441 | 0.444 |
| 0.32 | 0.228 | 0.209 | 0.218 |
| 0.128 | 0.146 | 0.137 | 0.141 |
| 0.0512 | 0.114 | 0.107 | 0.110 |
1. 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷。
2. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用。
3. 試劑盒內(nèi)所有組分都必須恢復(fù)至室溫（18-25℃）后方可使用。
4. 試劑盒各組分使用前充分混勻，板條洗滌后拍干時(shí)，注意防止板條脫落。
5. 只有嚴(yán)格遵守說(shuō)明書(shū)的操作方法，全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證優(yōu)良檢測(cè)效果。
6. 注意在不同樣本和步驟間及時(shí)更換加樣槽和吸頭，避免交叉污染。
7. 最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。
8. 本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
| 問(wèn)題描述 | 可能原因 | 相應(yīng)對(duì)策 |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)梯度差 | 吸液或加液不準(zhǔn) | 檢查移液器及吸頭 |
| 酶標(biāo)板洗滌不完i全 | 保證洗板次數(shù)及每孔的洗液用量 | |
| 顯色很弱或無(wú)色 | 溫育時(shí)間太短 | 保證足夠的溫育時(shí)間 |
| 實(shí)驗(yàn)溫度不正確 | 使用推薦的溫育溫度 | |
| 試劑體積不夠或漏加 | 檢查吸液及加液過(guò)程，保證所有試劑按順序足量添加 | |
| OD值讀數(shù)低 | 酶標(biāo)儀設(shè)置不正確 | 在酶標(biāo)儀上檢查波長(zhǎng)和濾光片裝置 |
| 讀數(shù)前應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀進(jìn)行預(yù)熱 | ||
| 變異系數(shù)大 | 加液不正確 | 檢查加液情況 |
| 酶標(biāo)板底部有污染 | 檢查酶標(biāo)板底部是否有殘留的液體和手印 | |
| 板孔內(nèi)有異物或氣泡 | 加樣前確認(rèn)板孔內(nèi)無(wú)異物，加樣后確認(rèn)無(wú)氣泡 | |
| 背景值高 | 酶標(biāo)板洗滌不完i全 | 按說(shuō)明書(shū)推薦的方法進(jìn)行洗板 |
| 如果用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)檢查所有的加液口和排廢液口是否有堵塞 | ||
| 如果是手洗板，可適當(dāng)增加洗板次數(shù) | ||
| 洗液有污染 | 配制新鮮洗液 | |
| 靈敏度低 | 試劑盒保存不當(dāng) | 按說(shuō)明書(shū)要求保存相關(guān)試劑 |
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