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HG-ZY002-支原體DNA檢測試劑盒 qPCR-熒光探針法
  • HG-ZY002-支原體DNA檢測試劑盒 qPCR-熒光探針法

貨物所在地:天津天津市

更新時間:2025-05-26 16:06:43

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支原體DNA檢測試劑盒 qPCR-熒光探針法可用于定性檢測主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞以及臨床治療用細(xì)胞中是否存在支原體污染。柏萊源生物為譜新生物代理商,具體產(chǎn)品價格與技術(shù)問題等信息咨詢,請聯(lián)系我們!

    支原體DNA檢測試劑盒(qPCR-熒光探針法)說明書


貨號: HG-ZY002

支原體DNA檢測試劑盒 qPCR-熒光探針法


產(chǎn)品簡介:

支原體DNA檢測試劑盒可用于定性檢測主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞以及臨床治療用細(xì)胞中是否存在支原體污染。本試劑盒利用熒光探針法qPCR技術(shù),參照EP2.6.7和JPXVII支原體檢測相關(guān)要求進(jìn)行驗(yàn)證,可覆蓋100多種支原體,且與密切相關(guān)的菌種無交叉反應(yīng),檢測快速,在2h內(nèi)可完成檢測工作,專一性強(qiáng)。

規(guī)格:

50 Reactions

產(chǎn)品組成:

序號組分規(guī)格存儲條件
支原體Primer&Probe MIX120μL×1管-20℃及以下避光
2×qPCR Reaction MIX700μL×1管-20℃及以下
內(nèi)控(Internal Control)220μL×1管
陽性模板(Positive Control)500μL×1管
DNA稀釋液1.5 mL×3管


操作方法:

一、準(zhǔn)備工作

• 試劑盒準(zhǔn)備

將試劑盒各組分置于冰上或4℃,確保充分溶解開始操作。

• 需自備的耗材及設(shè)備

  1. 熒光定量PCR儀、渦旋儀、離心機(jī)

  2. 高精度移液器及一次性無菌無酶低吸附帶濾芯吸頭(0.1-2.5 µL、0.5-10 µL、10-100 µL、20-200 µL、100-1000 µL)

  3. 1.5 mL 無菌無酶低吸附離心管

  4. 無菌無酶八聯(lián)管或96孔qPCR板

二、操作流程

• 操作詳細(xì)步驟

1、待測樣本的提?。?/span>

建議使用譜新生物“支原體DNA樣本前處理試劑盒(HG-CL200)"提取樣本DNA。在加入樣本的同時,加入4 μL的內(nèi)控(Internal Control)。提取樣本時,建議同步提取DNA稀釋液作為陰性對照。

2、qPCR 反應(yīng)液的制備:

2.1 根據(jù)所需檢測的參考品和待測樣品數(shù)量(一般做2-3組復(fù)孔),計算反應(yīng)所需孔數(shù):反應(yīng)孔數(shù)=(1個無模板對照NTC+1個陽性對照PC+待測樣品)×復(fù)孔數(shù) 

2.2 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次所需的qPCR MIX總量:qPCR MIX =( 反 應(yīng) 孔 數(shù) +2 或 3)×12.5 μL(2×qPCR Reaction MIX)+( 反 應(yīng) 孔 數(shù) +2 或 3)×2.1 μL( 支 原 體 Primer&Probe MIX)+(反應(yīng)孔數(shù)+2或3)×0.4 μL(Internal Control)(2 或3為操作損失量) 

2.3 將所用試劑置于冰上完i全溶解,輕微振蕩混勻,瞬時離心,按下表所示配制:

組分單個反應(yīng)量
2×qPCR Reaction MIX12.5 μL
支原體 Primer&Probe MIX2.1 μL
內(nèi)控(Internal Control)0.4 μL
總體積15 μL



【注】:如果在提取時已加入內(nèi)控,則配制qPCR MIX時,用等體積的DNA稀釋液代替。

2.4 將配制的qPCR MIX,輕微振蕩混勻,瞬時離心,按15 μL/孔分裝至八聯(lián)管或者96孔板中。
2.5 將 DNA 稀釋液按10 μL/孔加到分裝了qPCR MIX八聯(lián)管或者96孔板中。
已融化未使用的DNA 稀釋液可在2-8℃短暫保存,若長期不使用,請儲存于-20℃。

3、qPCR 加樣:

3.1 將所需試劑置于冰上操作,輕微振蕩混勻,瞬時離心,加樣(總體積25 μL):


陽性組陽性模板各10 μL+所需qPCR MIX量15 μL
陰性組DNA稀釋液各10 μL+所需qPCR MIX量15 μL
實(shí)驗(yàn)組待測樣品各10 μL+所需qPCR MIX量15 μL







3. 2 實(shí)驗(yàn)可使用無菌無酶的八聯(lián)管或者96孔板進(jìn)行反應(yīng),需去除反應(yīng)體系中的氣泡,并離心至管底準(zhǔn)備反應(yīng)。

PCR程序設(shè)置

支原體檢測熒光基團(tuán)選擇FAM,淬滅基團(tuán)為None,內(nèi)控?zé)晒饣鶊F(tuán)選擇CY5,淬滅基團(tuán)為None,參比熒光為ROX(根據(jù)儀器要求選擇)。
反應(yīng)程序:



Stage1污染消化Reps:137℃2 min
Stage2預(yù)變性Reps:195℃30 s
Stage3循環(huán)反應(yīng)Reps:4595℃10s
58℃34s



程序中58℃ 34 s處設(shè)置為熒光收集;反應(yīng)體積25 μL。




結(jié)果分析


F A M 信 號CY5信號判定結(jié)果
陰性組CT≥40或無“S"型擴(kuò)增曲線CT<40且有“S"型擴(kuò)增曲線陰性
陽性組CT<40且有“S"型擴(kuò)增曲線CT<40且有“S"型擴(kuò)增曲線陽性
實(shí)驗(yàn)組CT≥40或無“S"型擴(kuò)增曲線CT<40且有“S"型擴(kuò)增曲線陰性
CT≥40或無“S"型擴(kuò)增曲線有抑制
CT<40且有“S"型擴(kuò)增曲線CT<40且有“S"型擴(kuò)增曲線陽性
CT≥40或無“S"型擴(kuò)增曲線有抑制


注意事項

1、本試劑盒已通過穩(wěn)定性(凍融等因素)的驗(yàn)證,無需分裝。
2、陰性樣品(2×qPCR Reaction MIX、Primer&Probe MIX 和 DNA稀釋液等)和陽性樣品(PC和待測樣品等)的配制和加樣環(huán)境需區(qū)分區(qū)域,不可在一個區(qū)域內(nèi)操作,配制人員需穿戴整齊,戴好口罩、手套和穿好潔凈服。
3、注意在不同加樣步驟間及時更換吸頭,避免交叉污染,避免長時開蓋,使用移液器移液時,需避免液體掛壁。
4、試劑盒必須在有效期內(nèi)使用,不建議不同批次的相關(guān)試劑混用。
5、試劑盒內(nèi)所有組分建議在低溫環(huán)境融化后使用,且需確保其充分溶解,各組分使用前需充分混勻,以保證試劑的均一性,經(jīng)混勻的試劑需經(jīng)短暫離心,以使管壁及蓋子上的液體全部集中于管底。若發(fā)現(xiàn)DNA稀釋液中有析出物,建議于 37 ℃條件下進(jìn)行孵育,使DNA稀釋液完i全溶解。
6、只有嚴(yán)格遵守說明書的操作方法,全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證最佳檢測效果。
7、最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。
8、公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
9、本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷。


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