鎳磁珠

鎳磁珠是一種廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域的磁性微球，主要用于蛋白質(zhì)的純化。這類磁珠通常由鎳離子(Ni2+)飽和的硅基磁珠制成，具有結(jié)合容量和穩(wěn)定性，特別適用于異源蛋白純化。

鎳磁珠的特點(diǎn)和優(yōu)勢

結(jié)合容量：鎳磁珠相比于鈷磁珠展現(xiàn)出較高的蛋白結(jié)合容量，特別是在處理高表達(dá)的異源蛋白時，其優(yōu)勢更為明顯。

易于自動化操作：鎳磁珠的使用可以實(shí)現(xiàn)不同體積濃度目標(biāo)蛋白的一步高通量純化，且易于自動化操作。

可重復(fù)使用：鎳磁珠可以反復(fù)使用，再生工藝簡單，這大大降低了純化成本和環(huán)境污染的風(fēng)險。

穩(wěn)定性：鎳磁珠可以在變性條件下使用，例如在6MGuanadine或8MUrea的存在下，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不易受到競爭性小分子的影響。

適用范圍廣：鎳磁珠適用于多種細(xì)胞類型和環(huán)境下的組氨酸標(biāo)簽蛋白純化，包括大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和動物細(xì)胞表達(dá)的組氨酸標(biāo)簽蛋白。

鎳磁珠的應(yīng)用流程

使用鎳磁珠進(jìn)行蛋白質(zhì)純化的一般流程如下：

樣品處理：首先，需要對細(xì)胞或細(xì)胞提取物進(jìn)行破碎和裂解，以釋放目標(biāo)蛋白。然后，將粗蛋白樣品與預(yù)處理的鎳磁珠進(jìn)行結(jié)合。

磁珠預(yù)處理：鎳磁珠需要先進(jìn)行預(yù)處理，包括充分混勻和磁性分離，以確保其表面均勻地吸附目標(biāo)蛋白。

目標(biāo)蛋白與磁珠結(jié)合：將粗蛋白樣品加入裝有預(yù)處理鎳磁珠的離心管中，輕輕翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠懸浮，并在旋轉(zhuǎn)混合儀上室溫旋轉(zhuǎn)混合一段時間。然后，將離心管置于磁性分離器上進(jìn)行磁性分離，移出上清液至新的離心管中。

磁珠洗滌：通過連續(xù)洗滌步驟，使用不同的緩沖液去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)。洗滌過程通常包括加入洗滌緩沖液到裝有磁珠的離心管中，輕輕翻轉(zhuǎn)離心管數(shù)次，使磁珠重新懸浮，然后進(jìn)行磁性分離。

目標(biāo)蛋白洗脫：最后，通過逐步增加洗脫緩沖液中的咪唑濃度，逐漸釋放結(jié)合在鎳磁珠上的目標(biāo)蛋白。當(dāng)目標(biāo)蛋白全部洗脫時，收集洗脫液到新的離心管中，即得到純化的目標(biāo)蛋白樣品。

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