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1-NM-PP1

MCE 國(guó)際站：1-NM-PP1

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-13942

CAS：221244-14-0

Synonyms：PP1 Analog II

純度：99.17%

存儲(chǔ)條件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶劑中 -80°C 2 年 -20°C 1 年

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：1-NM-PP1，細(xì)胞滲透性 PP1 類似物，是一種有效的 Src 家族激酶抑制劑，對(duì) v-Src-as1 與 c-Fyn-as1 的 IC50 值分別為 4.3 nM、3.2 nM。

生物活性：1-NM-PP1 是一種細(xì)胞滲透性 PP1 類似物，是一種有效的 Src 家族激酶 抑制劑，IC₅₀ 分別為 4.3 nM 和 3.2 v-Src-as1 和 c-Fyn-as1 分別為 nM^[1][2]。 IC50 和目標(biāo)：IC50：4.3 nM (v-Src-as1)、3.2 nM (c-Fyn-as1)、28 μM (v-Src)、1 μM (c-Fyn)、3.4 μM (c-Abl)、 29 μM (CDK2)、24 μM (CAMKII)、120 nM (cAbl-as2)、5 nM (CDK2-as1)、8 nM (CAMKII-as1)^[2] 體外： 來(lái)自 Cdk7^as/as 或 Cdk7^+/+ 的 Cdk7 > 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫沉淀并測(cè)試其對(duì)含有 Pol II CTD 的融合蛋白 (GST-CTD) 和人 Cdk2 的激酶活性。從突變體而非野生型細(xì)胞中回收的 Cdk7 被 1-NM-PP1 (1-NMPP1) 抑制，IC₅₀ 為~50 nM 與任一底物。用 Cdk7^as/as 替換野生型 Cdk7 也使 HCT116 細(xì)胞的生長(zhǎng)對(duì) 1-NM-PP1 敏感。在沒有 1-NM-PP1 的情況下，野生型和Cdk7^as/as 細(xì)胞的群體倍增時(shí)間分別為~17.9 和~20.2 小時(shí)，具有相似的異步培養(yǎng)中的細(xì)胞周期分布，表明 F91G 突變本身對(duì) Cdk7 功能的損害最小。純合 Cdk7^as/as 細(xì)胞對(duì) 1-NM-PP1 敏感，然而，通過細(xì)胞活力測(cè)量的 IC₅₀ ~100 nM (MTT) 測(cè)定在 1-NM-PP1 暴露 96 小時(shí)后進(jìn)行。相反，野生型 HCT116 細(xì)胞對(duì) 10 μM 1-NM-PP1 具有抗性。添加 10 μM 1-NM-PP1 會(huì)延遲突變體而非野生型細(xì)胞的 G1/S 進(jìn)程。當(dāng)與血清同時(shí)添加到 Cdk7^as/as 細(xì)胞時(shí)，1-NM-PP1 可防止在接下來(lái)的 15 小時(shí)內(nèi)進(jìn)入 S 期。 24 小時(shí)后，有證據(jù)表明部分 Cdk7^as/as 細(xì)胞從血清饑餓中直接釋放到含有 1-NM-PP1 的培養(yǎng)基中，從而進(jìn)入 S 期，而一小部分留在 G1 中。在添加血清后 3 小時(shí)或 6 小時(shí)添加 1-NM-PP1 可分別將進(jìn)入 S 期延遲約 7 小時(shí)或約 3 小時(shí)^[3]。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將野生型或Cdk7as/as HCT116細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中孵育48小時(shí)，使其同步化，然后將其釋放到含有10％胎牛血清的培養(yǎng)基中。使用胸腺嘧啶或諾考達(dá)唑進(jìn)行同步化，并通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布。通過MTT分析測(cè)量細(xì)胞活力[3]。MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

激酶實(shí)驗(yàn)：進(jìn)行免疫印跡和免疫沉淀以及免疫復(fù)合物的激酶測(cè)定。為了測(cè)量 Cdk1/細(xì)胞周期蛋白 B 組裝，將有絲分裂或 G2 細(xì)胞中的提取物（總蛋白 200 μg）與 2 μM 1-NM-PP1 或 DMSO 預(yù)孵育，然后加入 500 ng 純化的細(xì)胞周期蛋白 B1（氨基末端標(biāo)記有六組氨酸和 Myc 表位）和 ATP 再生系統(tǒng)。如有指示，孵育物補(bǔ)充 400 ng 純化的 Csk1 或 600 ng 野生型或類似物敏感的 T 環(huán)磷酸化 Cdk7/細(xì)胞周期蛋白 H/Mat1 復(fù)合物。室溫下 90 分鐘后，用抗 Myc 抗體對(duì) Myc-cyclin B 及其相關(guān)蛋白進(jìn)行免疫沉淀，用抗 Myc 和抗 Cdk1 抗體對(duì)免疫復(fù)合物進(jìn)行免疫印跡，并檢測(cè)組蛋白 H1 激酶活性[3]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

IC50 & Target：4.3 nM (v-Src-as1), 3.2 nM (c-Fyn-as1), 28 μM (v-Src), 1 μM (c-Fyn), 3.4 μM (c-Abl), 29 μM (CDK2), 24 μM (CAMKII), 120 nM (cAbl-as2), 5 nM (CDK2-as1), 8 nM (CAMKII-as1)[2]

銷售產(chǎn)品：ARN-3236  | Voclosporin  | Cetrorelix (Acetate)  | Abscisic acid  | Acivicin (hydrochloride)  | Pachymic acid  | β-Elemene  | Ticagrelor  | Galloylpaeoniflorin  | JH-RE-06

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Bishop A C, et al. Generation of Monospecific Nanomolar Tyrosine Kinase Inhibitors via a Chemical Genetic Approach. Journal of the American Chemical Society, 1999, 121(4):627-631.
[2]. Bishop AC, et al. A chemical switch for inhibitor-sensitive alleles of any protein kinase. Nature. 2000 Sep 21;407(6802):395-401.
[3]. Larochelle S, et al. Requirements for Cdk7 in the assembly of Cdk1/cyclin B and activation of Cdk2 revealed by chemical genetics in human cells. Mol Cell. 2007 Mar 23;25(6):839-50.