LC-MS/MS 如何助力Bottom-Up蛋白質(zhì)組學(xué)？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Bottom-Updànbáizhì組學(xué)通過(guò)將復(fù)雜dànbáizhì樣本酶解成肽段，再借助液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）進(jìn)行分析，以實(shí)現(xiàn)dànbáizhì的全面鑒定與定量。這yìliú程不僅提高了蛋白組學(xué)研究的靈敏度和通量，也為探索疾病機(jī)制、生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、藥物靶點(diǎn)篩選等領(lǐng)域提供了技術(shù)保障。

一、LC-MS/MS的基本原理與優(yōu)勢(shì)

1、什么是 LC-MS/MS？

LC-MS/MS 是液相色譜（Liquid Chromatography）與串聯(lián)質(zhì)譜（Tandem Mass Spectrometry）的組合系統(tǒng)，能高效分析復(fù)雜生物樣本中的蛋白衍生肽段。在該系統(tǒng)中，液相色譜首先對(duì)肽段進(jìn)行分離，降低樣品復(fù)雜度；隨后質(zhì)譜系統(tǒng)通過(guò)電噴霧電離（ESI）將肽段轉(zhuǎn)化為帶電離子，并在一級(jí)質(zhì)譜（MS1）中進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，再選擇特定肽離子進(jìn)行碎裂，進(jìn)入二級(jí)質(zhì)譜（MS2）分析其碎片離子，以此推測(cè)肽段序列，反推出對(duì)應(yīng)的蛋白信息。

2、為什么LC-MS/MS是Bottom-Up的核心？

LC-MS/MS在Bottom-Updànbáizhì組學(xué)中的地位bùkětìdài，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

（1）高靈敏度與廣譜性：可在復(fù)雜背景中識(shí)別低豐度蛋白，特別適用于探索型研究和疾病機(jī)制解析。

（2）高分辨率分離能力：結(jié)合納升級(jí)液相色譜和高分辨 Orbitrap 或 TOF 質(zhì)譜，可實(shí)現(xiàn)肽段的jīngzhǔn定性與定量。

（3）支持多種定量策略：無(wú)論是標(biāo)簽定量（TMT、iTRAQ）還是無(wú)biāojìdìng量（LFQ、DIA），LC-MS/MS 均能兼容并提供穩(wěn)定結(jié)果。

（4）兼容翻譯后修飾檢測(cè)：如磷酸化、乙?；⒎核鼗?，借助相應(yīng)富集技術(shù)，LC-MS/MS 可實(shí)現(xiàn)修飾位點(diǎn)級(jí)別的解析。

二、Bottom-Updànbáizhì組學(xué)流程中的關(guān)鍵步驟

成功的dànbáizhì組分析始于高質(zhì)量的蛋白提取。不同樣本類型（如細(xì)胞、組織、血液）對(duì)提取條件有不同需求。百泰派克采用多種裂解方案（RIPA、SDS、尿素裂解等）以及高效的雜質(zhì)清除流程（如乙醇沉淀、FASP），確保蛋白zuì大程度溶解并兼容后續(xù)質(zhì)譜分析。BCA 或 Bradford 法用于jīngquè定量，保證樣本間一致性。

在Bottom-Updànbáizhì組學(xué)流程中，蛋白需酶切為可被質(zhì)譜識(shí)別的肽段。zuì常用的酶是yídànbáiméi（Trypsin），其特異性高、切割模式穩(wěn)定。百泰派克通過(guò)jīngzhǔn控制酶與底物比例、反應(yīng)時(shí)間與溫度，優(yōu)化酶切效率并減少非特異性切割，提高蛋白鑒定覆蓋度。

酶切后的肽混合物中包含鹽、去污劑等干擾成分，需經(jīng)固相萃?。⊿PE）等手段純化。隨后，通過(guò)高性能液相色譜（HPLC）系統(tǒng)對(duì)肽段進(jìn)行分離，為質(zhì)譜檢測(cè)創(chuàng)造有利條件。部分項(xiàng)目還可結(jié)合高 pH 反向分離實(shí)現(xiàn)肽段預(yù)分級(jí)，提升蛋白覆蓋率。

百泰派克搭載多款gāoduān質(zhì)譜儀（如 Orbitrap Fusion Lumos、Q Exactive HF-X、timsTOF Pro），支持 DDA（數(shù)據(jù)依賴采集）、DIA（數(shù)據(jù)獨(dú)立采集）、PRM 等多種采集模式。我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)選擇合適方案，實(shí)現(xiàn)jīngzhǔn定量和全面鑒定。

質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng) MaxQuant、Proteome Discoverer、Spectronaut 等平臺(tái)處理后，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)、蛋白定性、定量及修飾識(shí)別。百泰派克提供定制化生信分析服務(wù)，包括差異分析、GO/KEGG 注釋、PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、富集分析等，幫助用戶深入理解蛋白表達(dá)變化背后的生物學(xué)意義。

三、應(yīng)用場(chǎng)景：從基礎(chǔ)研究到轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)

（1）疾病機(jī)制研究：比較病理狀態(tài)下的蛋白表達(dá)變化，挖掘潛在生物標(biāo)志物

（2）藥物作用機(jī)制解析：觀察藥物干預(yù)前后的蛋白網(wǎng)絡(luò)變化

（3）植物和微生物蛋白組研究：適應(yīng)復(fù)雜背景樣本的高通量分析

（4）翻譯后修飾研究：結(jié)合富集策略深入解析磷酸化、乙?；刃揎椖Ｊ?/strong>

百泰派克生物科技提供標(biāo)準(zhǔn)化的Bottom-Updànbáizhì組學(xué)服務(wù)，具備以下優(yōu)勢(shì)：

• 多種質(zhì)譜平臺(tái)選擇（Orbitrap、TripleTOF、TIMS-TOF）

• 完整的樣本到報(bào)告服務(wù)流程，適配多種研究需求

• 豐富的樣本經(jīng)驗(yàn)（人源、動(dòng)物、微生物、植物）

• 嚴(yán)格的質(zhì)控體系和zhuānyè的生信團(tuán)隊(duì)，保障數(shù)據(jù)質(zhì)量與可解釋性

LC-MS/MS 技術(shù)為 Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)注入強(qiáng)大動(dòng)力，讓我們能夠更深入地理解生命系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)變化。百泰派克生物科技依托先進(jìn)的質(zhì)譜平臺(tái)和成熟的前處理技術(shù)，致力于為科研人員提供高質(zhì)量、可重復(fù)的Bottom-Updànbáizhì組學(xué)解決方案。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

LC-MS/MS 如何助力Bottom-Up蛋白質(zhì)組學(xué)？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹