iTRAQ、TMT与SILAC：三大标记蛋白定量技术对比解析检测技术服务详情介绍

一、技术原理概览

1、SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）

SILAC 基于以稳定同位素标记的氨基酸（如13C6-Lys、13C6-Arg）在细胞培养过程中被细胞代谢吸收并整合进dànbáizhì结构，实现“体内"标记。通过使用含轻同位素和重同位素的氨基酸分别培养两组细胞样本，当细胞生长至多代后（通常为5-7代），其dànbáizhì被wánquán标记。随后，两个样本在蛋白提取阶段等量混合，经酶解、LC-MS/MS 分析，通过 MS1 层级的质量差异区分不同来源的肽段，计算重轻信号比值实现定量。SILAC 属于“代谢标记"的方法，天然地避免了实验过程中样本处理误差的问题。其zuì大优势在于样本混合发生在细胞裂解之前，极大降低了技术重复误差。

2、iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）

iTRAQ 是一种“化学等质量标签"技术，适用于蛋白酶解后的肽段。其原理是通过将肽段的N端及赖氨酸侧链用iTRAQ试剂进行化学标记。iTRAQ 试剂由 reporter group（定量部分）、balance group（平衡质量）和 peptide reactive group（反应基团）组成。不同标签在整体质量上相同，在MS1阶段不可区分，但在MS2阶段会释放出不同质量的 reporter 离子，从而实现不同样本的区分与定量。iTRAQ 目前支持 4-plex 和 8-plex，同时进行多个样本的并行定量，广泛应用于组织、血清等多种样本类型的dànbáizhì组研究。

3、TMT（Tandem Mass Tags）

TMT 技术与 iTRAQ 原理类似，均属于等质量标签，定量信息依赖于 MS2 阶段。TMT 由于其标签结构设计的改进，现已支持更高的多重能力，包括 TMT 10-plex、11-plex、16-plex，甚至18-plex。TMT 标签也由 reporter、balance 和 reactive 三部分构成，MS2 中通过 reporter ion 的强度实现相对定量。TMT 的优势在于更高的通量与更强的样本区分能力，尤其适用于大规模临床队列和单细胞蛋白组学研究，是当前应用zuì广泛的定量标记技术之一。

二、主要优缺点对比

三、技术比较解读

1、多重能力

（1）TMT 支持zuì高的 16-18 样本并行分析

（2）iTRAQ 支持 4 或 8 plex

（3）SILAC 为 2-3 重，NeuCode 拥有扩展性

2、定量jīngquè性

（1）SILAC 依靠 MS1 的质量差定量，更少技术误差

（2）iTRAQ/TMT 在 MS2 阶段利用 reporter ion，容易受 ratio compression 影响

3、样本适用性

（1）SILAC 只适合细胞培养模型

（2）iTRAQ/TMT 适用于细胞、组织、体液等样本

4、成本与流程

（1）SILAC 标记时间长，重同位素明显提高成本

（2）iTRAQ/TMT 标签成本高，需经验频道调整

五、技术选型建议

SILAC是高jīngquè、重复性好的蛋白定量技术，适用于细胞模型下的动态研究； iTRAQ 适合中级通量并行分析； TMT 则是当下zuì高通量、zuì适合专题研究和专家调置的投入性技术。由于三者分别在标记方式、定量经济和样本适用性上存在明显差异，科研人员应根据实验需求、预算与样本条件进行合理选型。

作为多年dànbáizhì组学服务商，百泰派克生物科技提供包括 SILAC、iTRAQ、TMT 在内的全流程标签定量方案：

1、高分辨 Orbitrap 质较平台

2、成熟标记和经典工艺流程，可实现重复 CV < 15%

3、全面应用案例，适配各类科研需求

4、用户培养和规范化工艺辅助

欢迎了解更多，我们望为您的dànbáizhì组研究贡献zhuānyè能力。在实际项目中，技术选型不仅取决于科学问题的本质，也受到实验平台能力的影响。百泰派克生物科技拥有高通量TMT/iTRAQ定量平台与SILAC优化体系，结合一站式质谱分析服务，能够为不同研究需求提供个性化解决方案，助力科研高效推进。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对dànbáizhì序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对dànbáizhì的氨基酸组成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服务。对于未知理论序列的dànbáizhì，提供基于从头测序法的dànbáizhì从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上*的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、dànbáizhì组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量dànbáizhì组学、靶向dànbáizhì组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种dànbáizhì组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种dànbáizhì标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.zhuānyè生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术*，*技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从dànbáizhì、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖dànbáizhì组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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