肽序列測(cè)定全解析：從原理到應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

肽序列測(cè)定（Peptide Sequencing）基于高分辨質(zhì)譜（MS）技術(shù)，通過(guò)對(duì)蛋白酶解產(chǎn)物的肽段進(jìn)行質(zhì)量分析、碎片解析與生物信息學(xué)比對(duì)，推導(dǎo)肽段氨基酸序列，從而揭示dànbáizhì（或多肽）中各氨基酸殘基的線性順序，從而解析dànbáizhì的一級(jí)結(jié)構(gòu)。肽序列測(cè)定不僅可以揭示dànbáizhì的組成與結(jié)構(gòu)，還可定位翻譯后修飾（PTMs）位點(diǎn)，幫助科研人員研究dànbáizhì的功能、相互作用及其在生命活動(dòng)中的作用，推動(dòng)蛋白zhìzǔxué、藥物開發(fā)、疾病機(jī)制研究。故從原理到應(yīng)用，掌握肽序列測(cè)定是蛋白組學(xué)研究、生命科學(xué)探索與生物醫(yī)藥開發(fā)中的重要一步。

一、肽序列測(cè)定核心原理

1、 蛋白酶解

使用yídànbáiméi、Lys-C、Glu-C等特異性酶將蛋白切割成適合質(zhì)譜分析的肽段。酶解反應(yīng)控制溫度、pH、酶量及時(shí)間，確保生成理想長(zhǎng)度和覆蓋度的肽段。

2、離子化與質(zhì)譜檢測(cè)

肽段通過(guò)電噴霧（ESI）或基質(zhì)輔助激光解吸（MALDI）技術(shù)離子化。高分辨質(zhì)譜（如Orbitrap、FTICR）對(duì)肽段分子離子進(jìn)行質(zhì)荷比（m/z）檢測(cè)，獲得肽段的整體質(zhì)量信息。

3、母離子選擇與碎片化（MS/MS）

選定特定母離子（前體肽段），在碰撞室中通過(guò)碰撞誘導(dǎo)解離（CID）、高能碰撞解離（HCD）或電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）生成b、y離子系列，解析肽段序列信息。

4、數(shù)據(jù)分析與序列推導(dǎo)

結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)搜索（如Mascot、MaxQuant）或de novo測(cè)序算法，解析碎片圖譜，推導(dǎo)肽段氨基酸序列，并定位翻譯后修飾（PTMs）位點(diǎn)。

二、肽序列測(cè)定的完整實(shí)驗(yàn)流程

肽測(cè)序的實(shí)驗(yàn)步驟主要包括以下八個(gè)環(huán)節(jié)：

1、樣品制備與蛋白提取

（1）使用含緩沖鹽、去垢劑和還原劑的裂解液，結(jié)合超聲、機(jī)械破碎等方法提取蛋白。

（2）還原（DTT）與烷基化（IAA）處理破壞二硫鍵，確保蛋白wánquán展開。

（3） jīngquè定量（BCA/Bradford/紫外法），控制蛋白濃度。

2、 蛋白酶解

（1） 單酶（Trypsin）或多酶（Trypsin+Lys-C、Glu-C）組合。

（2）反應(yīng)條件：37°C，pH 7.8–8.0，12–16小時(shí)。

3、多肽純化與脫鹽

（1）使用C18固相萃?。⊿PE）去除鹽離子和雜質(zhì)。

（2）對(duì)復(fù)雜樣品采用凝膠切割或SDS-PAGE純化。

4、液相色譜分離（LC）

（1） 采用納流LC（nano-LC）結(jié)合C18反相柱，基于疏水性分離肽段。

（2） 梯度優(yōu)化（流動(dòng)相水-乙腈+酸），提高分辨率和檢測(cè)靈敏度。

5、 離子化與質(zhì)譜檢測(cè)

（1）在線LC-ESI-MS/MS（液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜）。

（2） 高分辨質(zhì)譜（Orbitrap、FTICR）提供亞ppm質(zhì)量精度。

6、母離子選擇與碎片生成

（1）動(dòng)態(tài)排除與自動(dòng)增益控制（AGC），確保檢測(cè)低豐度肽段。

（2） 碎片模式：CID（適合常規(guī)碎片）、HCD（豐富碎片）、ETD（保護(hù)修飾信息）。

7、數(shù)據(jù)采集與序列解析

（1）數(shù)據(jù)庫(kù)搜索：匹配理論碎片譜（質(zhì)量偏差MS1：±10 ppm，MS2：±0.02 Da）。

（2）de novo測(cè)序：直接從碎片譜推導(dǎo)未知序列。

（3）多引擎（Mascot、MaxQuant、Byonic）與AI輔助（如Prosit）提高解析效率。

8、修飾定位與多維驗(yàn)證

結(jié)合保留時(shí)間、碎片圖譜、同位素分布，定位磷酸化、糖基化等修飾位點(diǎn)。

三、肽序列測(cè)定的應(yīng)用領(lǐng)域與前沿趨勢(shì)

1、應(yīng)用領(lǐng)域

（1） 蛋白zhìzǔxué研究：系統(tǒng)解析細(xì)胞、組織、血漿等樣品蛋白組。

（2）翻譯后修飾研究：定位磷酸化、乙?；⑻腔?、泛素化等關(guān)鍵修飾位點(diǎn)，揭示功能調(diào)控機(jī)制。

（3）新抗原發(fā)現(xiàn)：在腫瘤miǎnyìzhìliáo、疫苗研發(fā)中發(fā)現(xiàn)新抗原肽段。

（4）生物標(biāo)志物開發(fā)：篩選疾病相關(guān)肽段，用于早篩、診斷和療效預(yù)測(cè)。

（5）生物制藥質(zhì)量控制：驗(yàn)證蛋白藥物純度與批次一致性。

2、前沿趨勢(shì)

（1） 單細(xì)胞與空間層次肽測(cè)序：推動(dòng)單細(xì)胞、組織空間維度蛋白組學(xué)研究。

（2） 多技術(shù)融合：結(jié)合MS/MS、質(zhì)譜成像（MSI）、原位質(zhì)譜（DESI-MS），實(shí)現(xiàn)全景蛋白組解析。

（3） AI與深度學(xué)習(xí)輔助：提升復(fù)雜樣本中肽段鑒定和修飾定位的精度與效率。

作為蛋白組學(xué)和多肽測(cè)序領(lǐng)域的lǐngxiān服務(wù)商，百泰派克生物科技依托*的高分辨質(zhì)譜平臺(tái)（Orbitrap Fusion Lumos、Q-Exactive HF-X、MALDI-TOF/TOF）、自主開發(fā)的樣品制備和數(shù)據(jù)分析流程，為全球科研人員和企業(yè)客戶提供：從樣品到結(jié)果的全鏈路多肽測(cè)序解決方案； jīngzhǔn檢測(cè)低豐度、多修飾肽段，提升數(shù)據(jù)質(zhì)量；AI與多引擎算法（MaxQuant、Byonic、Mascot）提高解析準(zhǔn)確率與效率； zhuānyè團(tuán)隊(duì)定制化支持，解決復(fù)雜樣本中的多肽測(cè)序難題。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白zhìzǔxué分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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