體外下拉試驗檢測技術服務詳情介紹

體外下拉試驗（In vitro pull-down assay）又稱dànbáizhì下拉實驗，主要用于研究dànbáizhì與dànbáizhì、dànbáizhì與核酸或其他生物分子之間的相互作用。在體外下拉試驗中，通常將感興趣的dànbáizhì（稱為“誘餌"）固定在固相載體上，如瓊脂糖珠或磁珠，然后將含有可能與誘餌蛋白相互作用的其他dànbáizhì（稱為“靶"）的溶液加入反應體系中。通過洗滌和分離，未結合的dànbáizhì被去除，而結合的靶蛋白則被“拉下"并固定在固相載體上。后續(xù)通過電泳和質(zhì)譜等分析手段，可以鑒定出與誘餌蛋白相互作用的靶蛋白。體外下拉試驗通過模擬細胞內(nèi)復雜的生物環(huán)境，幫助科學家揭示分子間的相互作用機制，從而為理解生命過程提供信息。體外下拉試驗的應用非常廣泛。其不僅可用于確認已知的dànbáizhì相互作用，還可以用于發(fā)現(xiàn)新的相互作用網(wǎng)絡。此外，體外下拉試驗還可以幫助研究dànbáizhì復合物的組成，從而揭示復雜生物功能的分子基礎。例如，在信號傳導研究中，體外下拉試驗可用于鑒定參與特定信號通路的組成分子，從而為靶向治療提供線索。

一、體外下拉試驗分析步驟

1、準備：獲取高純度的目標蛋白，可通過原核或真核表達系統(tǒng)進行重組表達、純化；選擇合適的親和標簽（常見的有 GST、His 標簽等）標記目標蛋白，準備對應的固相載體；制備細胞裂解液，其含有豐富的細胞內(nèi)源性dànbáizhì，作為潛在相互作用蛋白的來源。

2、固定目標蛋白：將帶有親和標簽的目標蛋白與固相載體孵育，使二者特異性結合，從而將目標蛋白固定在載體表面。例如，GST 融合蛋白與 GST 親和樹脂結合，形成固定化的 “誘餌"。

3、孵育與結合：把固定有目標蛋白的固相載體放入細胞裂解液中，在適宜的溫度（常為 4℃）、時長（數(shù)小時至過夜）條件下緩慢搖動孵育，促進可能存在的相互作用蛋白與目標蛋白結合。

4、洗滌：孵育結束后，使用緩沖液多次洗滌固相載體，目的是洗去未與目標蛋白結合的雜蛋白，減少背景干擾，這一步驟對結果的特異性至關重要。

5、洗脫：運用合適的洗脫試劑（如含游離親和標簽的溶液、高鹽緩沖液、改變 pH 的緩沖液等）將結合在目標蛋白上的相互作用蛋白從固相載體上洗脫下來。

6、檢測：采用 Western blot、SDS - PAGE 電泳、質(zhì)譜分析等手段對洗脫下來的蛋白進行鑒定和分析。

二、注意事項與常見問題

1、非特異性結合：為了減少非特異性結合，通常需要在反應體系中加入高鹽、非離子型洗滌劑等，以提高結合反應的特異性。

2、dànbáizhì的穩(wěn)定性：反應條件（如pH、溫度）需要優(yōu)化，以保證dànbáizhì的穩(wěn)定性和活性，避免錯誤的相互作用結果。

3、信號強度：在檢測階段，確保檢測方法的靈敏度足夠高，以便正確識別低豐度的靶蛋白。

三、技術優(yōu)勢

1、高特異性與靈敏度：通過優(yōu)化反應條件和檢測方法，體外下拉試驗可以實現(xiàn)對特定分子間相互作用的高特異性檢測。

2、廣泛的適用性：無論是dànbáizhì、核酸，還是其他生物大分子，體外下拉試驗都能適應不同的分子類型。

3、實用性強：實驗操作相對簡單且結果直觀，適合大規(guī)模篩選和驗證。

體外下拉試驗憑借其優(yōu)勢，在dànbáizhì組學、藥物靶點發(fā)現(xiàn)、信號通路解析等眾多生物學研究領域，都是極為關鍵的研究手段。采用ISO9001質(zhì)量控制體系，獲國家CNAS實驗室認可，百泰派克生物科技致力于提供zhuānyè的Pull-down靶dànbáizhì譜鑒定服務，能夠根據(jù)客戶的研究需求設計和執(zhí)行定制化的實驗方案。無論是基礎研究還是應用開發(fā)，我們都致力于為您提供高質(zhì)量的實驗數(shù)據(jù)和科學支持，幫助您的研究項目取得成功。歡迎與我們合作。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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