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Activity-Based Protein Profiling(ABPP),即“基于活性位點的dànbáizhì譜技術",是一種聚焦dànbáizhì活性狀態(tài)、實現功能蛋白高通量識別與定量的優(yōu)良技術。它是連接“蛋白存在"與“蛋白在起作用"的關鍵橋梁,尤其在酶類蛋白研究、靶點發(fā)現、藥物篩選等方面展現出強大潛力。
一、什么是ABPP?
ABPP(Activity-Based Protein Profiling)是一種功能蛋白組學方法,基于小分子活性探針與酶類蛋白活性位點之間的特異性共價反應,實現對“處于活性狀態(tài)的dànbáizhì"的富集、鑒定與定量。與dànbáizhì組學不同,ABPP不關注所有蛋白,而專注于:
1、正在執(zhí)行生物功能的“活性蛋白";
2、特定酶類家族(如蛋白酶、磷酸酶、HDAC等);
3、與疾病發(fā)生、信號通路調控密切相關的動態(tài)分子。
二、ABPP技術原理解析
ABPP的核心在于“活性位點探針"對活性酶的特異性捕捉,具體工作機制包括以下三個核心組成部分:
1、活性探針(Activity-Based Probe, ABP)
探針是ABPP的“wǔqì",由三部分組成:
探針設計需針對不同酶類定制,確保特異性和穩(wěn)定性。例如,sīānsuān酶常用FP類探針,半guāngānsuān酶常用vinyl sulfone類探針。
2、探針與酶結合機制
(1)探針進入樣本后,僅與活躍酶的催化位點發(fā)生共價反應;
(2)非活性形式(如酶原、抑制狀態(tài)酶)不會被標記;
(3)標記后的酶可用于后續(xù)捕獲和質譜檢測。
這種共價反應是選擇性與穩(wěn)定性并重的核心化學事件,使ABPP得以實現“狀態(tài)識別而非簡單識別"。
3、富集與檢測流程
標記完成后,通過如下流程實現高通量分析:
(1)使用鏈霉親和磁珠(shēngwùsù標簽)或點擊化學連接物富集活性酶;
(2)蛋白酶解(如yídànbáiméi處理);
(3)進入質譜(LC-MS/MS)系統(tǒng)進行肽段鑒定和定量;
(4)得到活性蛋白譜圖,并可進行多組樣本的對比分析。
三、ABPP的技術優(yōu)勢
四、ABPP技術應用場景廣泛
ABPP已在以下研究方向中發(fā)揮關鍵作用:
疾病機制研究:繪制腫瘤、神經退行性疾病中酶類活性圖譜
藥物開發(fā)與篩選:評估候選分子對目標酶的抑制效果及脫靶風險
靶點驗證與篩查:在復雜體系中識別真正的“功能性"靶點
生物標志物發(fā)現:基于活性差異尋找早期診斷或分型指標
百泰派克生物科技ABPP技術平臺服務能力
百泰派克生物科技已建立覆蓋從探針設計到質譜解析的ABPP一站式服務平臺,可廣泛適用于人源樣本、動物模型、細胞系等多類型研究。
我們提供:
1、活性探針庫構建與篩選(支持酶類特異性定制)
2、探針標記+磁珠富集+酶解質譜全流程服務
3、Orbitrap Exploris 480平臺質譜分析,高通量+高靈敏度
4、提供活性蛋白譜圖、靶點變化趨勢、通路富集報告
百泰派克致力于幫助科研團隊挖掘dànbáizhì“活性層面"的信息,為靶點開發(fā)與機制研究提供更具價值的解決方案。無論是研究疾病機制,還是開發(fā)jīngzhǔn藥物,ABPP都能為研究者提供更真實、更有用的數據支撐。如果您希望開展基于ABPP的蛋白活性研究、功能靶點篩選或小分子驗證,歡迎聯系百泰派克生物科技,我們將為您提供高標準、高效率的技術服務,助力科研更進一步。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上優(yōu)良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
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百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
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百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
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采用金屬標記抗體技術,避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
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