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“靶向定量dànbáizhì组学"(Targeted Quantitative Proteomics)是一种高灵敏度、高特异性的dànbáizhì组分析策略,广泛应用于生物标志物验证、疾病机制研究、药效学评估和质量控制等领域。相比发现型(Discovery)dànbáizhì组学,靶向定量强调对特定目标蛋白进行jīngzhǔn、重复性强的定量分析。
本文将从基本原理、主流技术平台、实验流程到典型应用,系统梳理靶向定量dànbáizhì组学的核心内容,帮助研究人员科学选择合适的技术方案。
一、什么是靶向定量dànbáizhì组学?
靶向定量dànbáizhì组学以预选的蛋白或肽段为对象,通过设定特定的离子转移通道或全产物离子扫描策略,获取目标的定量信息。其特点包括:
1、明确靶点(目标蛋白或肽段)
2、使用标准品或内标进行定量校正
3、重复性强,适合临床与大样本研究
4、检测灵敏度远高于发现型蛋白组
二、主流技术平台
1、MRM/SRM(Multiple/Selected Reaction Monitoring)
(1)仪器平台:三重四极杆质谱(Triple Quadrupole)
(2)原理:选择特定前体离子 → 诱导断裂 → 检测特定产物离子
(3)特点:
* 高通量、低背景干扰
适合数十~数百个靶点的定量
与代谢组学中MRM思路一致
2、PRM(Parallel Reaction Monitoring)
(1)仪器平台:高分辨率质谱(如Orbitrap、Q-TOF);
(2)原理:选择前体离子 → 同时记录所有产物离子
(3)特点:
* jīngzhǔn度更高,特异性更强
适合复杂背景中的靶点识别
可应用于验证阶段或临床样本
3、DIA-based靶向方法
(1)趋势:整合高分辨DIA(Data-independent acquisition)技术,通过内标引导实现高效靶向分析
(2)优势:
* 提高多肽覆盖度
适合多样本高通量定量
三、靶向定量dànbáizhì组与发现型蛋白组的对比
四、靶向定量dànbáizhì组学实验流程概览
1、靶点筛选与肽段设计
* 来源于前期DIA分析、文献报道、数据库(如PeptideAtlas)
筛选稳定、特异、离子化效率好的肽段作为定量单位
2、标准品合成(可?。?/strong>
合成稳定同位素标记肽(SIS)用于juéduì定量
3、样本前处理
蛋白提取 → 酶解 → 净化 → 加入内标
4、质谱分析
根据项目选择MRM或PRM
5、数据处理与定量分析
Skyline、SkyQuant、Scaffold DIA等zhuānyè软件
五、靶向定量dànbáizhì组学的应用场景
1、生物标志物验证
在肿瘤、自身免疫病、感染性疾病等研究中,MRM/PRM常用于验证前期筛选出的候选蛋白,支持转化医学研究。
2、药效学与毒理学评估
监测药物干预前后特定蛋白的表达变化,评价药物靶点、作用通路是否被调控。
3、合成生物学与蛋白表达优化
在细胞工厂构建过程中,对关键酶蛋白的表达水平进行定量,优化表达效率。
4、质量控制与批间一致性检测
在生物制品生产(如抗体、重组蛋白)中监测特定杂质蛋白或功能位点表达。
在靶向定量dànbáizhì组学领域,百泰派克生物科技整合高灵敏三重四极杆质谱平台与高分辨Orbitrap平台,可提供包括MRM、PRM、内标定量在内的多种服务形式:
* 个性化靶点设计服务:支持文献挖掘、DIA数据整合、靶点筛选
高质量稳定同位素标记肽定制
标准化数据处理流程,保证结果一致性与可比性
支持从发现型蛋白组到靶向验证的全流程服务
靶向定量dànbáizhì组学是从“广撒网"到“jīngzhǔn打击"的关键一步,它在疾病机制研究、临床转化和生物制药中的价值不断提升。通过选择合适的技术平台(MRM或PRM)和优化实验设计,科研人员可以实现对目标蛋白的灵敏、稳定和可重复检测。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对dànbáizhì序列进行分析,提供基于质谱的蛋白测序分析服务,包括对dànbáizhì的氨基酸组成分析,N端测序,C端测序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服务。对于未知理论序列的dànbáizhì,提供基于从头测序法的dànbáizhì从头测序服务,对蛋白序列进行分析。
※服务优势:
1.采用目前世界上优良的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;
3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;
4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;
5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug,即可完成检测;
6.测序不受N端封闭,PEC和和糖基化等N端修饰的影响。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,提供定量dànbáizhì组学、靶向dànbáizhì组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种dànbáizhì组学分析服务。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì组学服务,助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。
※服务优势:
1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析,发现新的生物标记物;
2.体内体外多种dànbáizhì标记方法,适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;
3.质谱分析灵敏度高,实验结果重复度高;
4.可检测较低丰度蛋白,线性范围广;
5.zhuānyè生物信息学分析,分析更系统准确。
百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析,采用金属元素标记物(通常是金属元素标记的特异抗体)标记细胞表面和内部的分子,然后用流式细胞原理分离单个细胞,再用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析单个细胞的原子质量谱,zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。
※服务优势:
1.技术优良,*技术空白
采用金属标记抗体技术,避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题??稍诘ハ赴忝嫔隙远嘀种副晖苯斜碚?,百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。
2.分析数量大,成本较低
单细胞RNAseq受成本等因素限制,所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右,而流式质谱技术一次(单样本)就可分析至少10^5的细胞,实现了数量级的提高,且成本不高于单细胞RNAseq。
3.应用前景大
①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化,在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景;
②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外,质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰;
③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析,可从zuì小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究,旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案,深入挖掘未知的靶标。
百泰派克基于高分辨率质谱技术,MALDI TOF,高效色谱分离技术,提供一系列完善的生物药物分析方案,从dànbáizhì、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析,到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务,帮助生物医药生产商提高生物药物品质。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则,通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证,建立了完备的质量体系,数据冷热/异地备份,设备定期计量/期间核查,软件审计追踪,为客户提供一体化解决方案和技术服务,支持新药研发、药物申报注册和生产放行。
1.公司采用ISO9001质量控制体系,zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;
2.获国家CNAS实验室认可,为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务;
3.业务范围覆盖dànbáizhì组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等;
4.七大质量控制检测平台,满足您一站式服务需求;
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