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蛋白質相互作用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)被用于研究細胞或組織中蛋白質與其相互作用伙伴之間的物理聯(lián)系。其基本原理是利用特異性的抗體結合目標蛋白,從而將與其相互作用的其他蛋白質共同沉淀下來。蛋白質相互作用在細胞的各種生物學過程中扮演著關鍵角色,例如信號傳導、代謝調控和基因表達等。蛋白質相互作用免疫共沉淀不僅能夠研究蛋白質復合物的組成,還能提供關于蛋白質間直接或間接相互作用的信息。蛋白質相互作用免疫共沉淀廣泛應用于生命科學研究的多個領域。它可以驗證已知蛋白質相互作用、發(fā)現新的相互作用伙伴、研究蛋白質復合物的動態(tài)變化、以及分析信號通路中的關鍵節(jié)點等。通過結合質譜分析,研究人員可以進一步鑒定與目標蛋白相互作用的未知蛋白,從而加深對生物系統(tǒng)的理解。此外,蛋白質相互作用免疫共沉淀還能用于藥物篩選和功能分析,幫助識別和驗證藥物的作用靶點。在疾病研究中,特別是癌癥和神經退行性疾病,蛋白質相互作用免疫共沉淀已成為揭示病理過程的工具。
一、蛋白質相互作用免疫共沉淀的實驗流程
1、樣品制備
研究人員通常從細胞或組織中提取總蛋白質。樣品的質量直接影響實驗結果,因此需要特別注意蛋白質的完整性和濃度。使用適當的裂解緩沖液和蛋白酶抑制劑可以有效防止蛋白質降解。此外,樣品中的非特異性結合物質也需要盡可能去除,以提高實驗的特異性。
2、抗體選擇與結合
選擇合適的抗體是蛋白質相互作用免疫共沉淀成功的關鍵??贵w需要具備高特異性和高親和力,以確保目標蛋白及其相互作用伙伴的有效沉淀。通常,研究人員會預先測試抗體的特異性??贵w與目標蛋白結合后,使用蛋白A/G珠子進行免疫沉淀,從而實現復合物的捕獲。
3、洗滌與檢測
洗滌步驟旨在去除非特異性結合的蛋白質和雜質。多次洗滌有助于提高實驗特異性,但過多的洗滌可能導致目標蛋白的損失。在完成洗滌后,研究人員通常使用SDS-PAGE和免疫印跡(Western Blot)分析沉淀下來的蛋白質復合物。為了進一步鑒定與目標蛋白相互作用的蛋白質,質譜分析也常被用于此步驟。
二、蛋白質相互作用免疫共沉淀的優(yōu)勢與挑戰(zhàn)
1、優(yōu)勢
蛋白質相互作用免疫共沉淀技術具備多個顯著優(yōu)勢。它允許在接近生理條件下分析蛋白質間的相互作用,這意味著實驗結果更能反映真實的細胞內環(huán)境。并且該技術的操作流程相對簡便,不需要復雜的設備或jíduān的實驗條件,因而降低了實驗室的技術門檻。此外,這種方法還可以與其他技術相結合,如質譜分析和蛋白質印跡,進一步鑒定和驗證蛋白質相互作用的復雜網絡。
2、挑戰(zhàn)
蛋白質相互作用免疫共沉淀技術在應用過程中面臨若干挑戰(zhàn),非特異性結合是其中zuì為常見且棘手的問題。非特異性結合的發(fā)生可能導致實驗結果中出現假陽性,從而誤導研究結論。此外,抗體的交叉反應性可能引入非目標蛋白,從而增加背景噪聲。因此,在實驗初期,通常需要驗證抗體的特異性和效能,確保其適用于目標蛋白的檢測。實驗條件的優(yōu)化包括緩沖液的組成、洗滌條件、以及孵育時間和溫度等因素,這些都需要根據具體的蛋白質和細胞類型進行調整。
百泰派克生物科技提供zhuānyè的CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析服務,憑借豐富的經驗和優(yōu)良的分析方法,我們能夠為客戶提供高質量的數據和深刻的生物學洞察,助力您的科研項目。我們致力于jīngquè捕捉蛋白質相互作用的關鍵細節(jié),幫助研究人員揭示生物學過程中隱藏的復雜網絡。歡迎與我們攜手合作,共同推動生命科學研究的前沿發(fā)展。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對蛋白質序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對蛋白質的氨基酸組成分析,N端測序,C端測序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質,提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上優(yōu)良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現新的生物標記物;
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3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統(tǒng)準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優(yōu)勢:
1.技術優(yōu)良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。
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3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
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