上海轩泽康生物科研贝伐珠单抗(Avastin)ELISA检测试剂盒组成及试剂配制：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 ppb

1. 酶标板（Microelisa stripplate）：一块（96孔或者48孔）

2. 标准品（Standard）：0.3ml*6管或者0.3ml*6管

3. 稀释液（Sample Diluent）：6ml或者3ml

4. 检测抗体-HRP（HRP-Conjugate reagent）：10ml或者5ml

5. 20x洗涤缓冲液（20X Wash solution）：25ml或者15ml（按说明书进行稀释）

6. 底物A（Chromogen Solution A）：6ml或者3ml

7. 底物B（Chromogen Solution B）：6ml或者3ml

8. 终止液（Stop Solution）：6ml或者3ml

9. 封板膜（Closure plate membrane）：2张

10. 说明书（User manual）：1份

11. 自封袋（Sealed bags）：1个

样品收集、处理及保存方法：

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

科研贝伐珠单抗(Avastin)ELISA检测试剂盒操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。