样品收集、处理及保存方法：斑马鱼雌激素(E)ELISA检测试剂盒 课题研究

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被雌激素（E）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌激素（E）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

斑马鱼雌激素(E)ELISA检测试剂盒 课题研究试剂盒组成:

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80 pg/mL

关于ELISA试剂盒操作常见的问题，上海轩泽康生物一一为您解答：

1. 一次ELISA实验需要多长时间？

答：双抗体夹心ELISA法一次实验需要3。5-4小时，竞争ELIA法一次实验需要2-2.5小时

2. 为什么有的试剂盒是采用竞争ELISA法？

答:小分子抗原或半抗原因为缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法。其原理是标本中的抗原和固相载体上的抗原竞争生物su化抗体上的结合位点，标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的生物su化抗体愈少，*的显色也愈浅。即显色深浅与样本中的抗原浓度成反比。小分子激素等ELISA测定多用此法。

3. 试剂盒做的结果不理想怎么办？

答：实验结果不理想请及时与客服或技术支持取得联系，我们可以帮助您一起分析实验结果。如果仅凭实验数据无法判断，您可以将试剂盒发回我们进行售后检测。