实验条件的选择

在 ELISA 中，选择各种实验条件很重要，包括：

(1)固相载体的选择：许多物质都可以用作固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、纤维素等。可以是孔板、试管、珠子等形式，常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。无论是何种载体，使用前都可以进行筛?。喊坏攘康目乖谙嗤氖笛樘跫陆蟹从?。

(2)包被抗体(或抗原)的选择：当抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度好，一般要求pH在9.0～9.6之间在吸附过程中。吸附温度、时间和蛋白质的量也有一定的影响，一般4℃18～24小时。蛋白质包被的最佳浓度需要滴定：即在包被不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）后，在其他测试条件相同的情况下观察阳性样品的OD值.选择 OD 值最高、蛋白质含量最少的浓度。对于大多数蛋白质，通常为 1-10 μg/ml。

（3）酶标抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法滴定初始效价（见酶标抗体部分）。然后固定其他条件或采用“方阵法"（包被材料、待测样品对照品和酶标抗体处于不同稀释度）在正式实验系统中准确滴定工作浓度。

(4)酶底物和氢供体的选择：氢供体的选择要求便宜、安全、显色反应明显，但本身是无色的。一些供氢体（如OPD等）具有潜在的致癌作用，应予以?；?。有条件的应选用非致癌、高灵敏度的供氢体，如TMB、ABTS等，都是比较满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱停止反应。通常底物作用时间为10-30分钟。底物溶液必须新鲜配制，特别是在使用前应立即加入 H2O2。

安全性

1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

11． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

自备材料

1． 蒸馏水。

2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振荡器及磁力搅拌器等。

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