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外泌體的組成和提純方法介紹
閱讀：1529 發(fā)布時間：2023-3-1
外泌體是由各種細胞分泌的小型膜囊泡（直徑30~100nm），存在于大多數(shù)體液（如血液、尿液、髓液等）和細胞培養(yǎng)液中。外泌體是由脂質雙層膜包被的膜囊泡，產(chǎn)生于稱為多囊泡體的細胞外囊泡中，多囊泡體通過與細胞膜融合將外泌體釋放到細胞外。外泌體含核內(nèi)體來源的蛋白質（如ESCRTs）、細胞內(nèi)運輸相關蛋白（如RabGTPase等）及細胞膜來源蛋白（如CD63, CD81等）等各種內(nèi)分泌細胞來源的蛋白和RNA，同時還含有分泌細胞膜來源和內(nèi)體膜來源的脂質（如膽固醇和鞘磷脂等）。
外泌體的組成：
外泌體富含膽固醇和鞘磷脂，具有脂質雙分子層結構，幾乎所有的外泌體都有微管蛋白、肌動蛋白結合蛋白、四跨膜蛋白。不同細胞來源的外泌體組成存在差異,例如腸上皮細胞來源的外泌體含有多種代謝酶及腸組織特異性A33抗原，B細胞來源的外泌體富含CD86和MHC分子，T細胞來源的外泌體表面有促凋亡的FasL受體。
外泌體的提純方式有哪些？
1、超速離心法
這是外泌體提取常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。
2、過濾離心
這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。
3、密度梯度離心法
用此種方法分離到的外泌體純度 高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。
4、免疫磁珠法
這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH 和非 生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗 。
5、PS親和法
該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度z高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。
6、色譜法
這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不廣泛。
7、微流控分離法
該方法通過負壓及震蕩等機械原理分離外泌體，產(chǎn)量純度均具有較大幅度提高，但需要特定設備配合。