一、制備細胞生長培養(yǎng)基
所使用的培養(yǎng)基將取決于所使用的細胞類型。例如:
使用無菌技術在II級安全帽下工作。
二、在顯微鏡下檢查細胞
在生長過程中，應該每天檢查細胞，以確保它們健康并按預期生長。它們應該主要附著在燒瓶的底部，形狀圓而豐滿或細長，并在其膜周圍折射光線。這表明他們是健康的。
介質應該是粉橙色。如果細胞大量分離和/或看起來干癟和顆粒狀/顏色深，則丟棄細胞，不要用于檢測。
三、制備細胞懸浮液
1. 所有細胞處理和培養(yǎng)基制備應在II類安全柜中使用無菌技術進行。
2. 當細胞融合70-80%時，它們仍應處于生長的對數(shù)階段，可用于電鍍。
3. 首先將培養(yǎng)基在37°C水浴中加熱至少30分鐘。
4. 準備好后，小心地從一個175平方厘米的培養(yǎng)皿中倒入所需細胞的培養(yǎng)基（含有實驗室消毒劑），注意不要增加任何滴入的污染風險。
5. 立即更換，小心地倒入100毫升預熱好的新鮮培養(yǎng)基。
6. 使用細胞刮板，輕輕刮掉燒瓶底部的細胞到培養(yǎng)基中。有些細胞系可能需要胰蛋白酶化。在繼續(xù)之前，檢查燒瓶底部，檢查所有的細胞是否脫落。
7. 確保待計數(shù)的細胞懸浮液通過輕搖瓶混合均勻。必要時可使用血清學移液管。
8. 在細胞wan全有機會沉淀之前，使用血清學移液管取出約1ml細胞懸液，并將其放置在附注管中。
9. 用血細胞計進行細胞計數(shù)。
四、獲得正確的細胞密度
使用下面的計算得到正確的細胞密度。這應該是4.5 × 105個細胞/mL左右，但需要根據(jù)細胞系進行優(yōu)化。
N = df
45 × 104
N是每毫升細胞數(shù)
DF是計算出來的稀釋系數(shù)
由于細胞在100ml培養(yǎng)基中，接下來的計算是：
100 mL x稀釋因子
這將給出細胞應該在的介質體積的值。
用血清學移液管加入適量的預熱培養(yǎng)基。
例子:
如果細胞計數(shù)為55 × 104/mL，有100 mL細胞懸液：
55 × 104細胞/mL = 1.22
45 × 104細胞/mL
100毫升× 1.22 = 122毫升
因此，對于45 × 104/mL的細胞懸浮液，在100 mL細胞懸浮液中加入22 mL預熱培養(yǎng)基。
如果正確細胞密度所需的體積小于100ml：
將細胞倒入50ml離心管中。
在離心機中以100轉/分旋轉10分鐘，確保離心機平衡。
小心地倒出上清。
將細胞顆粒重懸于所需體積的預熱培養(yǎng)基中。
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