細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)是基于多種技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)細(xì)胞克隆篩選的。其中,熒光標(biāo)記技術(shù)是關(guān)鍵之一。通過將特定的熒光蛋白或熒光染料與目標(biāo)基因或蛋白質(zhì)偶聯(lián),使表達(dá)目標(biāo)產(chǎn)物的細(xì)胞能夠發(fā)出特定波長的熒光信號(hào),從而在眾多細(xì)胞中被識(shí)別出來。例如,在抗體制備中,可將編碼抗體重鏈和輕鏈的基因分別與不同熒光蛋白基因融合表達(dá),當(dāng)細(xì)胞成功表達(dá)完整的抗體時(shí),會(huì)同時(shí)顯示兩種熒光信號(hào),以此作為篩選標(biāo)志。
此外,圖像分析技術(shù)也不可少。系統(tǒng)配備高分辨率的成像設(shè)備,能夠捕捉細(xì)胞的形態(tài)、熒光強(qiáng)度等特征信息,并借助專業(yè)的圖像分析軟件對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析,快速準(zhǔn)確地判斷細(xì)胞是否符合篩選標(biāo)準(zhǔn)。
細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)的主要類型及特點(diǎn):
-高通量系統(tǒng):這是一款專為哺乳動(dòng)物細(xì)胞系開發(fā)設(shè)計(jì)的系統(tǒng),擁有5組熒光通道,可同時(shí)使用3組,能夠在短時(shí)間內(nèi)自動(dòng)化篩選并挑取更高水平表達(dá)的細(xì)胞克隆。它避免了傳統(tǒng)的有限稀釋方法,顯著提高了篩選效率和克隆產(chǎn)量,節(jié)省了時(shí)間和成本。該系統(tǒng)簡(jiǎn)化了從初始克隆篩選到單克隆驗(yàn)證的整個(gè)過程,對(duì)于抗體開發(fā)和生物制藥開發(fā)至關(guān)重要,可確保準(zhǔn)確性與高效性。
-微生物克隆篩選系統(tǒng):主要用于自動(dòng)化合成生物學(xué)工作流程,可快速準(zhǔn)確地選擇和篩選微生物克隆,非常適合DNA組裝、蛋白質(zhì)工程和抗體開發(fā)等應(yīng)用,具有可擴(kuò)展性與高效性的特點(diǎn)。
一般包括以下幾個(gè)步驟:將待篩選的細(xì)胞接種到合適的培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中,使其形成單克隆細(xì)胞群落。然后,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記或采用其他可檢測(cè)的標(biāo)記方式,使目標(biāo)細(xì)胞克隆具備可識(shí)別的特征。接著,將培養(yǎng)板放入細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)中,系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)對(duì)每個(gè)細(xì)胞克隆進(jìn)行成像和分析,根據(jù)預(yù)設(shè)的篩選標(biāo)準(zhǔn),如熒光強(qiáng)度、細(xì)胞形態(tài)等,識(shí)別出符合條件的目標(biāo)克隆。該系統(tǒng)可以自動(dòng)挑取這些目標(biāo)克隆,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)環(huán)境中進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)和驗(yàn)證。