在微生物采样过程中，交叉污染可能源于设备残留、人员操作、环境微生物或样本间相互污染，需从全流程实施严格的防污染措施。以下是分场景的标准化操作指南及技术要点：
一、采样前的设备与耗材灭菌
1.硬件灭菌规范
可重复使用设备：
金属采样头（如撞击式采样器）：121℃高压蒸汽灭菌20分钟（GB/T38512-2020），或使用70%乙醇+火焰灼烧（适用于现场应急处理）。
塑料部件（如采样泵管路）：用0.1%过氧乙酸浸泡30分钟，再用无菌水冲洗3次，晾干后紫外照射（254nm，≥30分钟）。
一次性耗材：
培养皿、采样袋等需选用辐照灭菌产品（钴-60照射，剂量≥25kGy），拆封前检查包装完整性（ISO11607-1标准）。
2.灭菌效果验证
每次灭菌后进行生物监测：放入嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953孢子条，灭菌后培养（56℃，48小时），菌落数应为0（GB8599-2021）。
二、采样现场的操作防污染体系
1.人员无菌操作准则
三级防护要求：
普通环境：穿戴一次性实验服+医用手套（如丁腈手套），采样前用75%乙醇擦拭手套表面。
高风险环境（如临床样本）：需穿戴无菌隔离衣+护目镜+双层手套，每采样1次更换外层手套。
动作规范：
采样时手臂避免越过采样口上方，保持采样头距身体≥30cm，呼吸方向与采样口呈90°夹角。
禁止在采样区域内整理头发、触摸面部，如需调整设备，需先更换手套或消毒手部。
2.空间分区与气流控制
采样区划分：
设置50cm×50cm的无菌操作区，用75%乙醇喷洒桌面形成消毒带，采样器放置于区域中央。
高洁净度场景（如ISO5级洁净室）需在层流工作台（风速0.36-0.54m/s）或生物安全柜（BSC-II级）内操作。
气流干扰控制：
采样前关闭门窗，停止空调系统运行10分钟（避免气流携带外源微生物），人员走动控制在1米外。
三、样本采集过程的隔离措施
1.分批次采样防交叉方案
批次间隔消毒：
每完成1个样本采样后，用75%乙醇擦拭采样器外壳、采样口及操作台面，作用5分钟后再进行下一样本采集。
若采集不同类型样本（如环境样本与临床样本），需更换全套采样头及管路，避免残留微生物混淆。
2.特殊样本的隔离技术
高浓度样本处理：
处理污水、粪便等高负荷样本时，使用带负压过滤的采样器（如MilliporeEZ-Pak），采样后立即密封滤芯，防止气溶胶扩散。
致病菌采样：
采用生物安全型采样头（如带HEPA过滤的闭合式采样器），采样后放入防漏金属罐（内层铺吸水纸+0.5%次氯酸钠溶液）。
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