一種檢測樣品體系中微量蛋白的方法,包括:提供待測蛋白的一抗修飾的免疫磁珠和二抗修飾的納米顆粒;將一抗修飾的免疫磁珠和二抗修飾的納米顆粒與含有待測蛋白的樣品體系混合孵育,形成雙抗夾心結(jié)構(gòu)復(fù)合體;使復(fù)合體以單顆粒形式通過微納孔裝置并引發(fā)電脈沖信號,分析電脈沖信號得到復(fù)合體的電荷狀態(tài)或者體積/質(zhì)量狀態(tài),根據(jù)電荷狀態(tài)或者體積/質(zhì)量狀態(tài)計算樣品體系中待測蛋白的數(shù)量。本發(fā)明通過免疫特異性結(jié)合磁珠的方式,檢測單個磁珠復(fù)合體的電荷狀態(tài),從而計算出微量蛋白的絕對數(shù)量,檢出限低至單個蛋白分子,可以檢出常規(guī)免疫檢測檢出下限以下的微量蛋白,可廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測、微生物檢測、細(xì)胞分離等領(lǐng)域。