Huh-7/Sorafenib耐药细胞培养条件：*培养基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+5ug/ml  FU
血清我们推荐用:
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。
培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

培养条件：
*培养基：90%DMEM +10%胎牛血清+2ug/ml Sorafenib
血清我们推荐用:
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。
培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

 

传代方法：
收到细胞后，在倒置镜下(最好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。 
3. 按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是一传二。
注：1、观察细胞最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。
冻存方法：冻存液：90%胎牛血清，10%DMSO
  储存：液氮储存 

 

支原体（mycoplasma） 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。
支原体污染会对细胞培养有何影响？
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。
CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？
定期（至少每两周一次） 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
为何培养基保存于4 ℃ 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性？
培养基保存于4 ℃ 冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂（通常为phenol red） 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤之CO2， 以调整pH 值。