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武汉原生原代生物医药科技有限公司

小鼠肝窦内皮细胞传代方法供参考

时间:2022-9-8 阅读:179
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  小鼠肝窦内皮细胞分离自肝脏组织,是用混合酶灌流消化、反复低速离心、密度梯度离心法,并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
  小鼠肝窦内皮细胞对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
  方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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