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人肺微血管内皮细胞培养实验方法
人肺微血管内皮细胞分离自肺组织;肺是机体的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆盖于心之上。肺有分叶,左二右三,共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连,故称喉为肺之门户,鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障,该屏障对于肺气体交换,调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。
人肺微血管内皮细胞培养实验方法:
1. 将肺组织至于无菌的培养皿中用含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗若干次至无明显血细胞;
2. 剪取肺组织边缘微血管丰富的组织,用含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗两次;
3. 将剪取的肺边缘组织剪成2-3mm3 大小,加入含双抗的1×PBS(pH=7.4)清洗;
4. 用进行过灭菌处理的玻璃滴管将剪碎的组织块和清洗用的1×PBS(pH=7.4)一起转入15ml离心管中;
5. 250rpm/min离心2 min,小心倾去液体,再加入适量的含双抗的1×PBS(pH=7.4),用玻璃滴管吹吸液体以清洗组织块;
6. 继续250rpm/min离心2 min,小心倾去液体,重复上述步骤若干次,直至离心后的液体中观察不到明显的红色;
7. 将清洗好的组织块重新转至无菌的培养皿中,用无菌的200 ml的吸头将组织块贴于25cm2 培养瓶中;
8. 加入2ml培养基,将培养瓶倒置放于37℃、5%CO2 的培养箱中2-3h之后正置培养瓶继续培养;
9. 培养若干天后,可观察到组织块周围陆续有细胞爬出,继续培养几天,直至组织块周围的细胞达到较高密度(培养其间两天换液一次,换液操作时动作一定要轻柔,以防组织块被摇下);
10. 当组织块附近的细胞生长到较高密度后,将贴壁的组织块吹下,换新的培养基继续培养24;
11. 24h后,用0.25%的Trypsin-EDTA消化细胞,FBS中止消化,将消化后的细胞悬液转入15ml离心管,1000rpm/min离心5min,之后倾去废液,用培养基重悬细胞,转入原来的培养瓶中,继续在37℃、5%CO2 的培养箱中培养。
以上就是人肺微血管内皮细胞的相关介绍,供大家参考。