PriCells: 从CB-MNCs中分离CD34+细胞      

试剂和材料：
1. 培养基；
2. 过柱缓冲液：pH7.2的PBSA，添加0.5%牛血清白蛋白和2mmol/L EDTA或0.6%枸橼酸葡萄糖A方（ACD-A）。用真空装置除去缓冲液中的气体；
3. FcR阻断剂；
4. CD34微球；
5. 柱子（MS+/RS+或LS+/VS+）；
6. 磁珠细胞分离仪（如MiniMACS）；
7. 尼龙过滤网，30μm；

实验方法：
1. 准备过柱缓冲液，用抽真空装置去除气体；
2. 每108个CB-MNCs用终体积300μl缓冲液重悬；
3. 每108个CB-MNCs悬液加100μlFcR阻断剂，抑制CD34微珠非特异性结合或通过Fc受体介导与非靶细胞的结合；
4. 每108个CB-MNCs悬液加100μlCD34微球进行细胞标记，充分混匀后在6-12℃冰箱放置30min；
5. 加PBSA洗，室温200g离心100min；加适量的缓冲液重选细胞；
6. 根据CB-MNCs的细胞总数选择合适的柱子类型（MS+/RS+或LS+/VS+），将柱子放入MACs分离仪的磁场中，加入缓冲液润洗柱子（MS+/RS+：500μl；LS+/VS：3ml）；
7. 用30μm尼龙过滤网过滤细胞，去除细胞团。使用前，用缓冲液湿润柱子；
8. 将细胞悬液加入柱子，使未结合的细胞通过柱子；
9. 用缓冲液将未结合的细胞洗去（MS+/RS+：3×500μl；LS+/VS：3×3ml）；
10. 洗脱结合的细胞；
（1） 将柱子从分离仪中移出；
（2） 置于合适的管中；
（3） 将柱子加满缓冲液（MS+/RS+：1ml；LS+/VS：5ml）；
（4） 用柱子随带的内塞，加压将结合的细胞冲洗出来；
11. 加PBSA将CD34+细胞洗一遍，室温200g离心10min。用适当的培养基重悬细胞；