人脐静脉内皮细胞细胞株培养问题：

　　Q1. 人脐静脉内皮细胞液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？

　　要冷藏??！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。

　　Q2.人脐静脉内皮细胞 液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ?C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺?；∫窖赴行脑谄浞裣钅恐信渲品肿傲烁吲ǘ龋?00倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-24C保存。

　　人脐静脉内皮细胞培养过程：

　　HUVEC为原代细胞，除复苏、冻存过程中与常规细胞系如293T等贴壁细胞雷同外，需主要注意的是培养液放置温度、Trypsin消化细胞过程。

　　1）培养液放置温度：细胞代理销售公司技术推荐在使用前30min室温（25-27℃）中放置配制好的培养液，用脸贴培养瓶而感觉到不冷（即接近人体温）即可使用。Trypsin/EDTA solution、TrypsinNeutralizer solution可同样处置。

　　2）Trypsin消化细胞过程：加入4mL Trypsin/EDTA solution/ 25cm2 flask后晃

　　动3次，吸弃3mL Trypsin/EDTA，室温中作用1-3mins，显微镜下观察细胞变圆、脱离培养皿即可加入3mL Trypsin Neutralizer solution进行终止作用。

　　3）转移细胞至15mL离心管中，1000rpm 离心5mins，弃上清，加入新鲜的培养液转移至新的培养皿/瓶。

　　4）复苏、冻存雷同其他细胞操作，细胞复苏、传代后不可多次传代，一次复苏的细胞尽量满足连续性试验需要。