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PriCells: 四乙基罗丹明标记抗体﹠四甲基异硫氰酸罗丹明标记抗体

时间:2021-10-19 阅读:307
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PriCells: 四乙基罗丹明标记抗体﹠四甲基异硫氰酸罗丹明标记抗体
        
四乙基罗丹明标记抗体:
1. 称取1g RB200及2g PCL5放在乳钵中于通风橱中研磨5min;
2. 加入10ml无水丙酮,不断搅拌,5min后过滤,用滤液进行标记抗体。剩 
余部分吸附在滤纸上,于4℃干燥保存;
3. 量取一定量的浓度为20mg/ml的抗体,按1:1:1的比例分别加入等体积
的生理盐水和0.5mol/L pH9.0的碳酸盐缓冲液来稀释抗体;
4. 再加入0.1ml的RB200溶液,边滴加边搅拌,在0—4℃中结合12—18h;
5. 用生理盐水透析5—7h,经葡萄糖凝胶G-50柱层析,除去游离荧光素,
分装,保存于4℃备用;

四甲基异硫氰酸罗丹明标记抗体:
1. 量取10ml浓度为6mg/ml的IgG,加在浓度为0.1mol/L pH9.5的碳酸盐缓冲液中透析过夜;
2. 将四甲基异硫氰酸罗丹明按每毫克IgG加入5—20μg的比例溶于浓度为1mg/ml二甲基亚砜中,取此溶液300μl,逐滴加入抗体溶液中,同时用电磁搅拌;
3. 在室温中避光搅拌2h;
4. 把结合物移入直径3cm,高30cm的Bio-Gel P-6层析柱,此层析柱已用0.01mol/L pH8.0的PBS平衡过,流速为1.5ml/min;
5. 收集到的先流出的红色结合物即为标记抗体,分装后于4℃保存备用;


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