PriCells: 正常小鼠原代破骨细胞培养方案

实验材料：

1. 正常小鼠乳鼠颅盖骨组织；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；

3. 0.1%Ⅰ型胶原酶；

4. 培养器具：培养瓶或皿（用多聚赖氨酸包被）、200目不锈钢网筛、眼科剪、镊子等；

培养方法：

1. 选用出生1-3天小鼠乳鼠，处死，放入75%酒精中浸泡2—3分钟，转至超净工作台内，取颅盖骨；

2. 将组织放入含有1×PBS（pH7.2）中冲洗3次；

3. 用眼科剪将颅盖骨剪成1×1mm3大小组织块，转至15ml离心管内，加入0.1%Ⅰ型胶原酶，37℃水浴消化90min；

4. 加入含血清的培养基，终止酶反应；

5. 将消化后的组织过200目网筛，收集滤液于15ml离心管中，1000rpm/min离心10min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞；

6. 调整细胞密度以合适的密度接种入培养瓶，放置于37℃，5%CO2培养箱中培养。待细胞长满瓶皿的生长表面即可传代；

7. PriCells-原代骨细胞细胞特制基础培养基；

8. PriCells-原代骨细胞细胞培养特制添加剂

9. PriCells-原代细胞分离试剂盒；

10. PriCells-原代细胞鉴定试剂盒；