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人外周血白细胞的分离
正常人外周血白细胞的分离
一、自然沉降法
正常人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000～1000:1，两类细胞的沉降速度不同，进行正常人外周血白细胞分离。
1、试剂及配制
1）无Ca2+、Mg2+ Hank’s液。
2）含10%～20% 灭活小牛血清Hank’s液。
2、操作方法
1）取静脉血2ml，放入加有抗凝剂的试管中，轻轻混匀。
2）将试管直立静置于室温或37℃温箱中30～60min，待红细胞自然沉降。此时可见试管中的悬液分3层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，在紧贴红细胞层上有一呈灰白色的白细胞层（正常人外周血白细胞）。
3） 用毛细管吸取位于红细胞层上面的富含白细胞的细胞悬液，移入另一试管中；
4） 加入无Ca2+、Mg2+Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min 离心10min，弃上清，同法在洗涤两次。
5）沉淀细胞用适量10%～20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×106/min。
二、加速红细胞沉降法
利用高分子量的聚合物促使红细胞凝聚成串钱状，从而加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。常用的高分子聚合物有明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纤维素等。
1、试剂及配制
1）3%明胶（粘度为25泊以上）：选取优质明胶，用生理盐水配成3%溶液，置沸水浴加热溶解，分装，高压蒸汽灭菌8磅15～20min。
2）6%右旋糖酐（分子量200～400KD）：用生理盐水配制。
2、操作方法
1）取抗凝静脉血加入等量3%明胶盐水或6%右旋糖酐溶液中，混匀。
2）将试管直立静置室温或37℃温箱中30～60min，利用明胶与红细胞的粘合作用，促使红细胞快速下沉，而白细胞留在明胶溶液中。
3）用毛细吸管吸取富含白细胞的上层液，移入另一试管中。
4）加入无Ca2+、Mg2+Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min 离心10min，弃上清，同法在洗涤两次。
5）沉淀细胞用适量10%～20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×106/min。
三、正常成人白细胞正常值
1、白细胞数值
成年人外周血液中正常的白细胞数值是4～10×10g/L，如果少于4×10g/L为白细胞减少，超过10×10g/L及为白细胞增多。
正常值范围：（单位为×109个/L）
（1）成人为4.0-10.0
（2）新生儿为15-20
（3）6个月到2岁为11-12
（4）4到14岁为8
2、白细胞分类计数
在外周血液中可以看到的白细胞，一般可分：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等五种。其中以中性粒细胞最多，其次为淋巴细胞，其他的白细胞很少。所谓白细胞分类计数就是计算各种白细胞在它的总数中所占的百分比数。
正常值为：中性粒细胞：50～70%
嗜酸性粒细胞：0.5～5%
嗜碱性粒细胞：0～1%
淋巴细胞：20～40%
单核细胞：1～8%