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小鼠心肌成纤维细胞(原代)

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更新时间:2025-02-12 13:36:12浏览次数:79次

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一、小鼠心肌成纤维细胞简介 心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官,主要功能是提供压力,把血液运行至身体各个部分

一、小鼠心肌成纤维细胞简介

心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官,主要功能是提供压力,把血液运行至身体各个部分。心脏的作用是推动血液流动,向器官、组织提供充足的血流量,以供应氧和各种营养物质,并带走代谢的终产物(如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等),使细胞维持正常的代谢和功能。
心脏中,心肌成纤维细胞约占正常心肌组织细胞总数的60%-70%,是心脏中非心肌细胞的主要组成部分,广泛存在于心脏组织中,包围心肌细胞,连接心肌细胞间质,与缺血性心脏病、炎症、肥大、梗死等病理状态密切相关。
本公司生产的小鼠心肌成纤维细胞采用酶解法制备而来,细胞总量约为5×105/T25方瓶,波形蛋白(Vimentin)、盘状结构域受体(DDR2)免疫荧光染色呈阳性,细胞纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法

1 、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:

取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入 37 , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时, 以稳定细胞状态,然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液(备注: 先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞, 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长,以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡 ,最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时,弃 T25 方瓶中的培养液, PBS 清洗细胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟,倒置显微镜下观察,待细胞基本脱落后加入培养基终止消化,用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm/min,离心 5min;
3)弃上清,沉淀细胞用 10ml 培养基重悬,然后按 1:2 比例进行分瓶传代, 最后放入 37 ,5%CO2 胞培养箱中培养;
4)待细胞贴壁后, 观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存
1)细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时,弃 T25 方瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟,倒置显微镜下观察,待细胞基本脱落后加入培养基终止消化,用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm/min,离心 5min
3)用适当量的冻存液(培养液: FBSDMSO=7:2:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20 1h,然后将其移入-80℃过夜, 24h 后转入液氮中进行长期储存(或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存)。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具 ,快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞转移至含 5ml 培养液无菌离心管中,1000rpm 离心 5min ,然后加入 5ml 全培养液混匀细胞, 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 细胞培养箱中培养;
3
第二天,换用新鲜培养基继续培养。

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