OverExpressC43(DE3)大肠杆菌感受态细胞
产品信息：
组成 BC210-01 BC210-02
OverExpressC43(DE3) 10×100?l 20×100?l
pUC19 质粒 5?l 5?l
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。
产品介绍：
OverExpressC43(DE3)菌株适用于毒性蛋白的表达，来源于OverExpressC41(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白
在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株,该菌株的基因突变降低了T7 RNA聚合酶的酶活性，下调毒性蛋白的表达量使
细胞存活。OverExpress C43(DE3)菌株是通过另一个毒性蛋白对OverExpress C41(DE3)菌株再次进行毒性耐受性实验获得的，
OverExpress C43(DE3)菌株比OverExpress C41(DE3)更加耐受毒性蛋白。OverExpress C43(DE3)菌株也可以表达常规蛋白，相同条件
下，蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpressC43(DE3)菌株属于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C43(DE3)
感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率可达1×10 7 cfu/μg DNA。
基因型：F -ompT hsdSB (rB -mB -) gal dcm (DE3)
菌株抗性：对氨苄，，和四环素敏感。
质粒转化步骤：（以氨苄抗性的 pET 质粒为例）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指管底，轻
轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨苄抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养 12-24 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，
取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更
大的单克隆菌落。）
蛋白表达步骤：
1. 挑取单菌落，接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中。
2. 37℃，200rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）。
3. 加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM，37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜。（可以设定不同浓度的 IPTG 来诱导表达）
4. 诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总
蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）。
5. 重组蛋白大量表达时，可用 10ml 过夜培养物转接到 1L 培养基中，当培养到 OD600=0.4-0.8 时，加入终浓度为 0.4mM 的 IPTG，
37℃诱导 4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的条件有所不同，需在实验中优化）。


南京万木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向国内外市场专业研发、生产和销售细胞、 外泌体、ELISA 试剂盒、 抗体、重组蛋白及相关试剂。产品在免疫学、信号转导、代谢、 神经科学等领域内都有科学文献发表，被国内外多所大学、研究机构和药学平台使用并发表文献多达1000多次。我公司凭借优异的产品和完善的服务 体系现已受到广大国内外用户的青睐和认可。
品牌优势
1、产品优势：产品具有高特异性、回收率高、线性好、变异系数低、稳定性好；
2、质量保证：产品质量稳定，每批次产品必须通过 QA、QC 检测才可出库；
3、实力强大： 标准实验室、研发中心，动物房 ；
4、技术支持：技术部 5*8 小时技术问题及时解答；
5、服务周到：发货及时，三个工作日顺丰快递；售后无忧，包退包换。
6、研发、生产科研产品：ELISA 试剂盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、仓鼠、猪、马、鸡、犬、豚鼠、猴、绵羊等多种属1000多种指标；
抗体：兔多抗、鼠单抗种类丰富，一抗 1 万余种，二抗 100 多种；
重组蛋白：多项发明，原核表达系统稳定表达蛋白 1000 余种。


扫一扫，加微信
联系电话：19156044901 （同微信） ，QQ： 3361589519