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P25149-pLKO.1-PNPO(human)-shRNA1基因沉默質(zhì)粒
  • P25149-pLKO.1-PNPO(human)-shRNA1基因沉默質(zhì)粒

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更新時間:2025-05-08 21:00:08

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pLKO.1-PNPO(human)-shRNA1基因沉默質(zhì)粒
啟動子U6
復制子pUC
克隆菌株Stbl3
培養(yǎng)條件37度
載體宿主哺乳細胞,慢病毒
基因種屬人
基因類型shRNA
原核抗性Amp
真核抗性Puro

注意事項:轉化前請準確查找該質(zhì)粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質(zhì)粒,室溫放置1min;

2、從-80冰箱中取出相應的感受態(tài),置于冰盒上解凍,并做好標記;

3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中,冰浴30min

4、42熱激90s,再冰浴2min;

5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,180rpm震蕩培養(yǎng)45min;

6、6000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8、將平板正向培養(yǎng)1h,再倒置培養(yǎng)12h~16h;

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)12h~16h,根據(jù)實驗需要提取質(zhì)粒

 

pLKO.1-PNPO(human)-shRNA2基因沉默質(zhì)粒
pLKO.1-PNPO(human)-shRNA1基因沉默質(zhì)粒
pLKO.1-PNPO(human)-shRNA3基因沉默質(zhì)粒
pLKO.1-U6-Tnfaip6(mouse)-shRNA2-hPGK-mCherry-P2A-Neo基因沉默質(zhì)粒
pLKO.1-U6-Tnfaip6(mouse)-shRNA1-hPGK-mCherry-P2A-Neo基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-NR1D1(mouse)-shRNA1-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-MUC16(mouse)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-NR1D1(mouse)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-NR1D1(mouse)-shRNA3-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒
pLVX-U6-MUC16(mouse)-shRNA3-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒

 

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