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血清沉淀大揭秘:沉淀類型與應對策略

閱讀:728      發布時間:2024-12-16
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血清中含有豐富的營養物質,包括各種蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,其中一些物質在特定的條件下容易形成沉淀。無論血清產地、品質如何,血清凍融后產生沉淀是無法避免的,因此各類血清以及含有血清的產品都可能會產生沉淀。

 

血清沉淀類型

 

血清中的沉淀主要為兩類:

一類是絮狀沉淀,這是血清中的纖維蛋白原在解凍過程中轉化成纖維蛋白而形成的,絮狀物較大時肉眼可見。

 

圖片3.png

 

▲ 纖維蛋白絮狀沉淀

 

一類是白色顆粒樣沉淀,主要是血清中的磷酸鈣的析出。也有部分脂蛋白、膽固醇、冷凝集素、玻連蛋白、胎球蛋白等一些脂質或蛋白質析出。在顯微鏡下可呈現為黑點樣物質,有時會隨著液體晃動,因此常常與細胞碎片或細菌污染混淆。

 

如何去除血清沉淀

 

通過2000rpm 5min離心,取上清,即可去除大部分沉淀。但由于部分沉淀細小且在使用過程中可能繼續產生析出沉淀現象,因此很難wan全清除血清內的沉淀。

不建議過濾去除沉淀,因為沉淀會很快堵住濾膜導致過濾效果下降。

 

如何減少血清沉淀產生

 

血清出現沉淀是和血清的品質沒有必然關系,并不會影響細胞生長。然而過多的沉淀可能會妨礙實驗者對細胞的觀察,有時難以和微生物污染區分,影響實驗者對細胞狀態的判斷。

 

那么如何避免血清產生過多沉淀呢?造成沉淀過多產生的主要原因有熱滅活、長時37℃或室溫放置,反復凍融等。因此為了避免沉淀過多,應當正確使用和保存血清:

 

冰凍的血清使用前放2-8℃冰箱過夜融化

室溫或水浴融化將會加速沉淀的產生

融化后上下顛倒混勻,不要劇烈搖晃

解凍后盡快使用完

非必須不滅活

不要反復凍融

 

如何區分血清沉淀和污染

 

纖維蛋白絮狀沉淀有時會被誤認為霉菌。鏡下觀察,纖維蛋白沉淀呈現透明絮狀,形態無規則。而霉菌形態較規則,有明顯的菌絲。二者還是比較容易分辨的。

 


 ▲ 左圖:血清沉淀  右圖:霉菌


                                  

磷酸鈣沉淀在鏡下為小黑點,常與細菌混淆。細菌通常會在1-2天內迅速增殖,導致培養基渾濁。而磷酸鈣沉淀在37℃會緩慢析出。將血清取樣空培養時,可以明顯看到黑色顆粒且可能隨培養時間增加而增多,該現象為高溫下析出增多現象并非污染,因此不建議采用空培養作為血清檢菌的方式。

 

若您確實對血清產品有污染疑慮,建議取少量血清涂布LB平板進行檢菌。

 

總之,了解血清中沉淀物的類型和正確的處理方法是非常重要的。通過合理的處理和預防措施,可以有效地減少血清沉淀。


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