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二手PCR儀的對(duì)照實(shí)驗(yàn)一般有哪幾種
閱讀：1491 發(fā)布時(shí)間：2022-1-24
二手PCR儀是一種核酸檢測(cè)和定量分析的新方法，可以作為傳統(tǒng)實(shí)時(shí)定量PCR的替代方法，以實(shí)現(xiàn)一致定量及稀有等位基因的檢測(cè)。數(shù)字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨(dú)、平行的PCR反應(yīng)，部分這些反應(yīng)包含了靶標(biāo)分子(陽(yáng)性)，而其他不包含(陰性)。單個(gè)分子可以被擴(kuò)增一百萬(wàn)倍或更多。在擴(kuò)增期間，TaqMan化學(xué)試劑及染料標(biāo)記探針可用于檢測(cè)特定序列的靶標(biāo)。當(dāng)不存在任何靶標(biāo)序列時(shí)，沒(méi)有信號(hào)累積。PCR分析后，陰性反應(yīng)片段用于生成樣品中靶標(biāo)分子的一致計(jì)數(shù)，而無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)標(biāo)。
納流芯片的使用提供了便捷和直觀的機(jī)制來(lái)同時(shí)平行運(yùn)行上千個(gè)PCR反應(yīng)。每個(gè)孔都加入了樣品、擴(kuò)增混合物和TaqMan測(cè)定試劑的混合物，然后進(jìn)行單獨(dú)分析以檢測(cè)存在(陽(yáng)性)或不存在(陰性)終點(diǎn)信號(hào)?？紤]到孔可能接收到多個(gè)靶標(biāo)序列分子，使用泊松模型應(yīng)用了一個(gè)校正因子。
一個(gè)合理的二手PCR儀實(shí)驗(yàn)室，要時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè)，考慮有無(wú)污染是什么原因造成的污染，以便采取措施來(lái)防止和消除污染。對(duì)于PCR儀的對(duì)照實(shí)驗(yàn)一般有以下幾種：
1.重復(fù)性試驗(yàn)。
2.選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
3.陽(yáng)性對(duì)照
在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽(yáng)性對(duì)照，它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽(yáng)性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照，其含量宜低不宜高(100個(gè)拷貝以下)。但陽(yáng)性對(duì)照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽(yáng)性標(biāo)本，其對(duì)檢測(cè)或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大。因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定，檢驗(yàn)人員心中有數(shù)時(shí)，在以后的實(shí)驗(yàn)中可免設(shè)陽(yáng)性對(duì)照。
4.陰性對(duì)照
每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對(duì)照包括：
?、贅?biāo)本對(duì)照
被檢的標(biāo)本是血清就用鑒定后的正常血清作對(duì)照;被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對(duì)照；
②試劑對(duì)照
在二手PCR儀試劑中不加模板DNA或RNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以監(jiān)測(cè)試劑是否污染。