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?生发中心激酶样激酶抗体技术的实验步骤

阅读:1074          发布时间:2023-6-28

生发中心激酶样激酶抗体技术的实验步骤:


一、准备好试剂与仪器:


磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。


二、实验步骤


1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。


2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。


3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。


4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。


5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。



抗体制备过程:


1.材料与试剂


a.提取的动物 Ig


b.弗氏佐剂和弗氏不佐剂


d.实验动物 兔


e.其它材料及试剂


2、选择实验活体。


3、进行动物免疫实验。


4、试取血样进行测试,查看免疫效果。


5、如果免疫成功,杀死实验活体,采集全部血清。


6、纯化出抗体。


7、鉴定抗体。胎牛血清(无菌采制)


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