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 细胞钙离子检测实验原理：

Fluo-3广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506 nm处被吸收,可以被氩离子激光的488 nm激发光激发,便于检测。Fluo-3在没有 同钙结合的情况下,无荧光产生。但是,在与钙结合后,荧光( 526 nm )增强至少40倍。Fluo-3/AM是一 种可以穿透细胞膜的荧光染料。 Fluo-3/AM的荧光非常弱 ,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3/AM进 入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3 ,从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,大激发波长为506 nm ,大发射波长为526nm。实际检测时*使用的激发波长为488 nm左右,发射波长为525-530 nm。
 细胞钙离子检测实验步骤：
1)用激光共聚焦培养皿培养细胞。去除培养基后,用PBS洗涤细胞,然后加入适量含有fluo-3/AM的PBS缓冲液( fluo-3/AM终浓度为0.5-5μM ),置于37°C避光孵育 30分钟。探针浓度和负载时间需要根据细胞类型进行调整,可查阅文献。
2)用PBS溶液轻洗2次,再加入PBS缓冲液，继续孵育20 min , 37°C ,确保fluo-3/AM在胞内*水解成fuo-3。
3)用LCSM采集荧光信号, 激发波长488 nm ,发射波长525 nm。
注意:此处理方法适用于贴壁细胞。如果是悬浮细胞或半悬浮细胞,可低速离心收集细胞后,进行处理，
然后取细胞悬液滴在共聚焦盖玻片上直接观察。