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iTRAQ

背景簡介：iTRAQ和TMT的技術原理一樣，所不同的是二者的分子結(jié)構(gòu)有差異。與SILAC相比（標記蛋白質(zhì)），iTRAQ和TMT是對肽段進行標記的。依據(jù)iTRAQ/TMT標簽的質(zhì)量數(shù)差異，通過MS實現(xiàn)對多組樣品中的蛋白質(zhì)進行相對定量：

SILAC是通過MS( MSl)對蛋白質(zhì)進行定量，而iTRAQ/TMT是通過二級MS( MS/MS．MS2)進行定量的；

iTRAQ/TMT兼容性好，并且能同時分析多達8-10組的樣品，分析通量高。

試驗流程

1、分別提取蛋白質(zhì)并定量；

2、Trypsin分別對蛋白進行酶解，提取肽段；

3、用不同質(zhì)量數(shù)的iTRAQ/TMT標簽分別對肽段樣品進行標記：

4、標記完成后，混合樣品，用SCX進行組分分離（15-20組分）；

5、對每個組分進行LC-MS分析：

6、蛋白質(zhì)鑒定與定量分析，篩選差異表達的蛋白；

7、生物學實驗驗證（Western blot，EUSA等）：