弗氏佐劑免疫性前列腺炎模型動物構(gòu)建

弗氏佐劑免疫性前列腺炎模型動物構(gòu)建

一、實(shí)驗(yàn)動物選擇

通常選用 Wistar或SD大鼠（體重240-300g）或 C57BL/6小鼠，雄性，年齡3月齡左右。

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二、模型構(gòu)建方法

1. 抗原制備

• 取雄性大鼠前列腺組織，經(jīng)勻漿、離心后提取前列腺蛋白提純液，用PBS緩沖液稀釋至 5-15 mg/ml 濃度。

• 需注意無菌操作，避免外源性污染。

2. 佐劑與抗原乳化

• 弗氏佐劑（CFA）配制：將石蠟油與羊毛脂按2:1混合，加入滅活結(jié)核分枝gan菌（終濃度2-20 mg/ml）。

• 乳化方法：將抗原與CFA按 1:1體積比 混合，通過注射器反復(fù)推注或研磨法形成穩(wěn)定的油包水乳劑。乳化合格標(biāo)準(zhǔn)：滴入冷水后乳劑不分散。

3. 免疫注射流程

• 初次免疫：

• 腹腔注射：給予百白破疫苗（大鼠0.5 ml，小鼠0.1 ml）以增強(qiáng)全身免疫反應(yīng)。

• 皮內(nèi)多點(diǎn)注射：在背部或腹股溝區(qū)注射抗原-CFA乳劑（大鼠1.0 ml，小鼠0.5 ml），分4-6點(diǎn)注射。

• 加強(qiáng)免疫：間隔30天后重復(fù)注射一次，可改用不弗氏佐劑（IFA）。

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三、模型評估指標(biāo)

1. 病理學(xué)檢測：

• 肉眼觀察：前列腺體積增大、質(zhì)地變硬，表面呈灰黃色。

• 組織切片：HE染色顯示間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤、腺腔或擴(kuò)張，電鏡可見基膜破壞。

2. 炎癥因子檢測：

• 通過qPCR或ELISA檢測前列腺組織中 TNF-α、IL-1β、iNOS 等炎性因子顯著升高。

3. 行為學(xué)指標(biāo)：

• 模型動物可能表現(xiàn)出排尿頻率增加、疼痛等類臨床癥狀。

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四、模型特點(diǎn)與適用性

• 優(yōu)點(diǎn)：模擬了人類慢性前列腺炎的免疫病理特征，如炎癥細(xì)胞浸潤和自身免疫反應(yīng)。

• 局限性：急性化學(xué)性炎癥反應(yīng)與臨床差異較大，需結(jié)合長期觀察。

• 應(yīng)用方向：適用于 發(fā)病機(jī)制研究（如纖維化、疼痛機(jī)制）和 藥物篩選（如抗炎中藥方劑）。

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五、注意事項(xiàng)

1. 無菌操作：避免手術(shù)感染干擾模型特異性。

2. 劑量控制：高劑量抗原（15 mg/ml）可穩(wěn)定誘導(dǎo)慢性炎癥，低劑量可能反應(yīng)不足。

3. 倫理審查：需符合動物實(shí)驗(yàn)倫理規(guī)范，減少疼痛刺激。