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细胞JC-1染色实验

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更新时间:2025-05-21 16:05:18浏览次数:5005次

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应用领域 医疗卫生,生物产业
细胞JC-1染色实验是伊莱博生物的基础服务项目之一,由经验丰富的实验人员操作完成。

一、实验原理

JC-1染料会根据线粒体膜电位变化呈现不同荧光特性:

  • ?正常线粒体?:膜电位高时,JC-1形成J-聚集体,发射红色荧光(Ex/Em=585/590nm)

  • ?受损线粒体?:膜电位降低时,JC-1以单体形式存在,发射绿色荧光(Ex/Em=514/529nm)

  • 红/绿荧光强度比可定量反映膜电位变化

二、实验材料准备

1. 主要试剂

  • JC-1染料(常用浓度1-5mg/DMSO储存液)

  • 无血清培养基或JC-1染色缓冲液

  • CCCP(50mM)作为阳性对照

  • PBS缓冲液

2. 仪器设备

  • 荧光显微镜/共聚焦显微镜

  • 流式细胞仪(可选)

  • CO?培养箱

三、实验步骤

1. 工作液配制

  • 将JC-1储存液用DMSO稀释至2.5-10μg/ml工作浓度

  • 或用染色缓冲液稀释(如50μL JC-1+8mL PBS+2mL 5×缓冲液)

2. 细胞处理

?贴壁细胞?:

  1. 培养至80-90%汇合度

  2. 弃培养基,PBS洗涤2-3次

  3. 加入JC-1工作液(六孔板1ml/孔)

  4. 37℃孵育15-30分钟

?悬浮细胞?:

  1. 离心收集细胞(300g,5min)

  2. 重悬于培养基(10? cells/ml)

  3. 加入JC-1工作液(0.5ml/50-100万细胞)

3. 洗涤与检测

  1. 孵育后用预冷PBS或染色缓冲液洗涤2-3次

  2. 贴壁细胞可消化后收集

  3. 荧光显微镜观察或流式检测

四、结果分析

1. 荧光观察

  • ?健康细胞?:线粒体呈红色荧光聚集

  • ?凋亡细胞?:绿色荧光扩散至胞质

  • 典型结果示例:CCCP处理的阳性对照几乎全部细胞显示绿色荧光

2. 数据分析

  • 流式细胞仪检测红/绿荧光强度比

  • 计算膜电位变化率:红绿比降低代表去极化

五、注意事项

  1. ?染料处理?:

    • 避免反复冻融,建议分装保存

    • 低温会凝固,需20-25℃水浴溶解

    • 稀释后立即使用,防止聚集

  2. ?实验控制?:

    • 设置未染色对照和CCCP阳性对照(通常50μM,5min)

    • 不同细胞类型需优化CCCP浓度和作用时间

  3. ?图像获取?:

    • 共聚焦显微镜建议488nm激发,530nm(绿)/590nm(红)双通道采集

    • 避免长时间光照导致荧光淬灭




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