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小鼠腦組織HE染色實驗服務
HE染色(蘇木精-伊紅染色)是觀察腦組織形態(tài)學結構的經典方法
。以下是詳細實驗步驟:
?固定液?:4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林
?染色液?:Harris蘇木素、0.5%伊紅Y
?梯度酒精?:70%-100%乙醇系列
?設備?:石蠟切片機、光學顯微鏡
麻醉后心臟灌注(生理鹽水→4%多聚甲醛)
完整取出腦組織,10%甲醛固定24-48小時
梯度脫水:70%→100%乙醇(每級45-90分鐘)
透明處理:二甲苯Ⅰ/Ⅱ各30分鐘
浸蠟與包埋:60℃石蠟浸漬1.5-2小時
冠狀切片(厚度4μm),42℃溫水展片
37℃烘箱過夜防脫片
?脫蠟復水?:
二甲苯Ⅰ/Ⅱ各12分鐘
100%→70%乙醇梯度(每級3分鐘)
蒸餾水沖洗
?染色?:
蘇木素染核13分鐘
流水沖洗3分鐘
溫水反藍10分鐘
伊紅染胞質15秒
?脫水透明?:
梯度酒精脫水
二甲苯透明
?封片?:
中性樹膠封固
50℃烘箱干燥20分鐘
?細胞核?:藍紫色(蘇木素著色)
?細胞質?:粉紅色(伊紅著色)
?特殊結構?:海馬區(qū)神經元分層清晰可見
?防脫片處理?:載玻片需經多聚賴氨酸(PLL)涂層
?染色控制?:蘇木素染色過深可用鹽酸酒精分色
?質量控制?:需設置正常腦組織對照
?應用分析?:可結合免疫組化驗證特定蛋白表達
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