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酵母菌的糖發(fā)酵試驗-杜氏管發(fā)酵法
閱讀：831 發(fā)布時間：2024-8-22一、原理介紹
酵母菌屬真核生物，與細菌相比，酵母菌具有更完整的呼吸系統(tǒng)，可將糖類（包括糖、醇、苷、甙等）全部氧化分解為二氧化碳和水，而細菌通常只能將糖類分解為低分子的有機酸等產物。因此，細菌的糖發(fā)酵試驗常用酸堿指示劑通過顏色的變化檢測某種糖是否能夠被細菌分解利用，而酵母菌則可以通過杜氏管觀察是否產氣，來判斷酵母菌是否能分解利用某種糖。
二、培養(yǎng)基的配制及接種
（1）基礎培養(yǎng)基（0.5%酵母液）：稱取0.5g酵母浸粉，加熱溶解于100mL純化水中，分裝至含導管的試管中，每支7.2mL（分裝量依試管尺寸而定，120mm試管可分裝3.6mL），115℃滅菌30min或121℃滅菌15min；
（2）糖溶液：單糖（如葡萄糖、半乳糖等）或雙糖（如蔗糖、乳糖等）用純化水配制成20%溶液，三糖（如棉子糖）用純化水配制成40%溶液，用0.22μm的微孔濾膜過濾除菌，備用。
（3）將過濾除菌的糖溶液0.8mL加入至滅菌后的含7.2mL基礎液的試管中（糖溶液：基礎液=1:9即可），混合均勻，并排掉導管內氣體；
（4）挑取活化好的待測菌株至生理鹽水中制成約106-108CFU/mL的菌懸液，吸取0.1mL菌懸液加入至糖發(fā)酵試管中，或用接種環(huán)（針）挑取菌苔直接接種至糖發(fā)酵試管中，25℃培養(yǎng)14天，逐日觀察倒管內是否有氣體產生。
三、試驗現(xiàn)象及解釋
a、b分別為白色念珠菌和釀酒酵母菌的葡萄糖發(fā)酵試驗，倒管內充滿氣體，即為葡萄糖發(fā)酵陽性反應；c、d分別為白色念珠菌和酵母菌的乳糖發(fā)酵試驗，倒管內無氣體產生，即為乳糖發(fā)酵陰性反應。
注：強陽性反應通常會在數(shù)天內觀察到氣體迅速充滿倒管；遲緩陽性反應通常要培養(yǎng)7-14天可觀察到氣體充滿倒管；若培養(yǎng)14天后倒管內僅有少量氣體，則為弱陽性反應；14天后若導管內無氣體，則為陰性反應。
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