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產(chǎn)品名稱：Cygnus F410 大腸桿菌宿主細(xì)胞ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：F410（96T/盒）

保存溫度：2～8℃

 
產(chǎn)品介紹：
Cygnus F410 E.coli HCP 大腸桿菌宿主細(xì)胞ELISA檢測試劑盒主要設(shè)計(jì)用于檢測產(chǎn)物重組表達(dá)過程中大腸桿菌宿主細(xì)胞污染，試劑盒使用的多克隆抗體對數(shù)百種HCPs具有反應(yīng)性。 Cygnus F410 E.coli HCP 大腸桿菌宿主細(xì)胞ELISA檢測試劑盒檢測濃度可達(dá)到 0.2ng/mL。
ELISA檢測相比Western Blot：Western Blots檢測過程復(fù)雜并需借助程序分析結(jié)果。而且，Western Blot本質(zhì)上是定性分析，不能得到定量結(jié)果，檢測靈敏性也受到樣本體積的限制。Western Blot在下游純化過程中檢測產(chǎn)物HCPs缺乏靈敏度和特異性。而微量滴定板ELISA檢測可以克服上述限制。ELISA具備高度靈敏性，可獲得半定量結(jié) 果，是純化工藝，過程控制，常規(guī)質(zhì)量檢測選擇。
產(chǎn)品使用時(shí)一定要做好保護(hù)措施：0.5M硫磺酸有強(qiáng)腐蝕性，要避免接觸眼睛、皮膚和衣物。檢測前所有試劑都要平衡到室溫。

檢測原理

大腸桿菌E. coli檢測是一個(gè)雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測。樣本中包含的E. coli HCPs蛋白與標(biāo)記有抗-E. coli 抗體的辣根過氧化物酶同時(shí)反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-E. coli 蛋白抗體的微量滴定板中進(jìn)行。免疫反應(yīng)構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加TMB作用底物 反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度，水解物濃度與E. coli  HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計(jì)算出E. coli HCPs蛋白含量。
 
 

檢測過程：

取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl Cygnus F410 大腸桿菌宿主細(xì)胞ELISA檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)液，對照物和樣品至待測孔→移取100µl anti-E. coli:HRP(#F411)至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育90分鐘，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加 100µl TMB 作用物(#F005)→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液(#F006)→分光光度計(jì)450/650nm讀數(shù)

檢測結(jié)果分析：

Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 標(biāo)準(zhǔn)液(0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL)可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 檢測結(jié)果數(shù)據(jù)分析可以使用計(jì)算機(jī)選配曲線，例如點(diǎn)到點(diǎn)，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標(biāo)注吸光值，X軸標(biāo)注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計(jì)算出樣品中HCP濃度。（操作時(shí)每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要滴定到兩個(gè)小孔中，以便計(jì)算平均分光光度值，樣品也需計(jì)算平均吸光值）。 

 
Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 組成成份：
● Anti- E. coli:HRP(辣根過氧化物酶標(biāo)記)　            1x12mL    F411(Product#)
● Anti- E. coli coated微量滴定板　                        12x8孔　   F412
● E. coli HCP標(biāo)準(zhǔn)液(0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL)     1mL/瓶　  F413
● Stop Solution終止液(0.5M硫磺酸)  　　　          1x12mL　F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨)　                      1x12mL　  F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍濃縮)　               1x50mL    F004

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